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求原核表达IL-2产物的生物活性实验方法
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本人现正在进行IL-2原核表达产物的生物活性鉴定,现求详细实验方案.请各位高手指点!邮箱:long0553@163.com [ Last edited by long0553299 on 2008-3-24 at 13:34 ] |
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elvias
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
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- 红花: 7
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- 在线: 91.5小时
- 虫号: 302177
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
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你可以用淋巴细胞增殖试验 操作步骤 无菌从肝素抗凝血中分离外周血单个核细胞(PBMC) 洗涤后用10％FCS RPMI1640调整细胞数为1～2×10６／ml ↓ 加入96孔培养板中，1～2×10５细胞／100μl／孔，每组设3孔。 加入最适剂量PHA，100μl／孔，同时设不加PHA阴性对照。如观察细 胞因子(如IL-2)或其它刺激物(PMA)对增殖功能的调节作用，则根据 加入因子的浓度而确定加入量，一般每孔最终体积为200μl ↓ 37℃、5％ CO２孵育，66h 每孔加入0.5～1μci ３H-TdR(50μl) ↓ 继续培养6～12h 用DYQ-Ⅱ型多头细胞收集仪收集样品 于"9999"型玻璃纤维滤纸上 ↓ 烤干后β液闪仪计数 计算 1. 增殖水平直接用CPM值表示。 2. 也可用刺激指数(SI)表示: PHA(或实验组)cpm-机器本底 SI＝─────────────── 阴性对照组cpm-机器本底 |
3楼2008-03-24 16:08:36
2楼2008-03-24 14:41:25
4楼2008-03-24 16:24:41
5楼2008-03-24 19:05:14
