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[交流] 求原核表达IL-2产物的生物活性实验方法

本人现正在进行IL-2原核表达产物的生物活性鉴定,现求详细实验方案.请各位高手指点!邮箱:long0553@163.com

[ Last edited by long0553299 on 2008-3-24 at 13:34 ]

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1楼 2008-03-24 13:28:38

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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
贵宾: 0.005
金币: 5850.5
红花: 7
帖子: 389
在线: 91.5小时
虫号: 302177
注册: 2006-12-02
性别: GG
专业: 肿瘤免疫

你可以用淋巴细胞增殖试验
操作步骤

　　　　　　无菌从肝素抗凝血中分离外周血单个核细胞(PBMC)
　　　　　　洗涤后用10％FCS RPMI1640调整细胞数为1～2×10６／ml
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　加入96孔培养板中，1～2×10５细胞／100μl／孔，每组设3孔。
　　　　　　加入最适剂量PHA，100μl／孔，同时设不加PHA阴性对照。如观察细
　　　　　　胞因子(如IL-2)或其它刺激物(PMA)对增殖功能的调节作用，则根据
　　　　　　加入因子的浓度而确定加入量，一般每孔最终体积为200μl
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　37℃、5％ CO２孵育，66h
　　　　　　　　每孔加入0.5～1μci　３H-TdR(50μl)
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　继续培养6～12h
　　　　　　　　　用DYQ-Ⅱ型多头细胞收集仪收集样品
　　　　　　　　　于"9999"型玻璃纤维滤纸上
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　　　　　烤干后β液闪仪计数

　　计算
　　1.　增殖水平直接用CPM值表示。
　　2.　也可用刺激指数(SI)表示:
　　　　　　　　　　　　PHA(或实验组)cpm-机器本底
　　　　　　　　　SI＝───────────────
　　　　　　　　　　　　　阴性对照组cpm-机器本底
　