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icewei

银虫 (小有名气)

[交流] 我的反转录失败了,原因何在?

我使用SDS-酚-异硫酸氰孤法提取的林木的RNA作为模板,电泳跑带18S和28S都很清晰,使用TAKARA的preme script反转录酶,用DDT作为反应体系的RNAase抑制剂。操作都是按照说明书上来的,怎么其产物在跑电泳时 老没有弥散的条带呢?我的反转录失败的原因在哪里呢?请高手支招啊 谢了!!
[search]反转录[/search]
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davidck

金虫 (正式写手)

呵呵 我也是在做植物RNA反转,用的反转酶和你用的一样,我之前扩出来一次,T载体没有连上,再扩就扩不出来了。我是南农的,你是哪个学校的?QQ号22932321,有空可以聊聊。
2楼2008-03-24 16:09:36
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taishuai2004

可以用ACTIN基因检测一下
3楼2008-03-24 20:57:21
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taishuai2004

可以用ACTIN基因检测一下

可以用ACTIN基因检测一下
4楼2008-03-24 20:58:47
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icewei

银虫 (小有名气)

好的,多谢楼上的朋友!
5楼2008-03-29 11:11:51
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icewei

银虫 (小有名气)

★ ★
asr(金币+2,VIP+0):恭喜一下 o(∩_∩)o...
经过多次失败,我的反转录到今天完全成功了!我重新提的RNA。每次沉淀RNA都用75%的乙醇清洗,最后一步TE缓冲液溶解后,加醋酸钠用乙醇或者异丙醇再次沉淀。然后75%的乙醇清洗!干燥。
6楼2008-03-29 11:42:55
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