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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的反转录失败了，原因何在？
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icewei

银虫 (小有名气)

[交流] 我的反转录失败了，原因何在？

我使用SDS-酚-异硫酸氰孤法提取的林木的RNA作为模板，电泳跑带18S和28S都很清晰，使用TAKARA的preme script反转录酶，用DDT作为反应体系的RNAase抑制剂。操作都是按照说明书上来的，怎么其产物在跑电泳时 老没有弥散的条带呢？我的反转录失败的原因在哪里呢？请高手支招啊 谢了！！
[search]反转录[/search]
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1楼 2008-03-24 11:09:25
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davidck

金虫 (正式写手)
呵呵 我也是在做植物RNA反转，用的反转酶和你用的一样，我之前扩出来一次，T载体没有连上，再扩就扩不出来了。我是南农的，你是哪个学校的？QQ号22932321，有空可以聊聊。
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2楼2008-03-24 16:09:36
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taishuai2004

可以用ACTIN基因检测一下
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3楼2008-03-24 20:57:21
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taishuai2004

可以用ACTIN基因检测一下

可以用ACTIN基因检测一下
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4楼2008-03-24 20:58:47
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icewei

银虫 (小有名气)
好的，多谢楼上的朋友！
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5楼2008-03-29 11:11:51
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icewei

银虫 (小有名气)
★ ★
asr(金币+2,VIP+0):恭喜一下 o(∩_∩)o...
经过多次失败，我的反转录到今天完全成功了！我重新提的RNA。每次沉淀RNA都用75%的乙醇清洗，最后一步TE缓冲液溶解后，加醋酸钠用乙醇或者异丙醇再次沉淀。然后75%的乙醇清洗！干燥。
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6楼2008-03-29 11:42:55
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