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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)

[求助] 璃珠直径≤106 μm 应该如何灭菌 已有2人参与

各位大侠好!

小弟从sigma买一种玻璃珠,直径≤106 μm , 货号G8893。现在用肉眼看为粉末状,我是想用他进行乳酸菌细胞破碎进而提取菌体DNA。但现在遇到一个问题,如何给这些粉末状的小珠子灭菌呢?说明说可以高压灭菌,但是相对湿度不可超过50%,否则玻璃珠会结块!那我应该是把玻璃珠融到水里灭菌 还是直接放入小瓶里干灭呢?或者还有其他好方法?

谢各位大侠不吝赐教,感激不尽!
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  • 附件 1 : 用玻璃珠提取基因组的方法.doc
  • 2014-06-11 14:33:27, 20 K

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shi16

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 陈雪爱小草 at 2014-06-16 12:43:15
可以问下,您说的的意思是将1ml的菌液清洗2次后获得菌泥,再加入破壁缓冲液??这个破壁缓冲液是什么呢?是生理盐水+与菌体同体积的玻璃珠??加多少量呢?...

上面顺序有点错了。网上有好几种方法的,你可以参考下我的,不知道是否适合你的菌和实验纯度要求。要求高建议用试剂盒,虽然试剂盒蛮麻烦的。
1。1ml菌液,STES洗涤菌两遍。(1遍也可以)
2。吸净上清,加30ul STES。
3。加玻璃珠,约于菌体等体积。 microprep震荡3min。
4。加200ul 氯仿/苯酚,200ul  ddH2O。
5。充分震荡混匀3分钟。高速离心10min,吸取上清至新离心管。(离心后是3层,上清约200ul)
6。加500ul  冰好的乙醇。充分混匀,离心10分钟,倒掉酒精。
7。加500ul 冰好的70%乙醇。充分混匀,离心10分钟,倒掉酒精。
8。等酒精完全挥发后,加入适量ddH2O溶解。
9楼2014-06-17 15:48:49
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shi16

银虫 (小有名气)

★ ★
dllchina: 金币+2, 多多交流 2014-06-11 21:56:00
我们实验室做基因组验证时,也用的sigma玻璃珠提的基因组,提酵母的。没有灭菌,直接用的,效果蛮好的。
提基因组做其他实验时,还是用的酶解法,因为担心玻璃珠会使基因组断裂。
玻璃灭的话,感觉应该干热灭菌就可以了。
2楼2014-06-11 14:50:41
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提基因组DNA的话不用灭菌,直接用就行
3楼2014-06-11 22:28:24
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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shi16 at 2014-06-11 14:50:41
我们实验室做基因组验证时,也用的sigma玻璃珠提的基因组,提酵母的。没有灭菌,直接用的,效果蛮好的。
提基因组做其他实验时,还是用的酶解法,因为担心玻璃珠会使基因组断裂。
玻璃灭的话,感觉应该干热灭菌就 ...

感谢回复!还想问下,用玻璃珠提取酵母的基因组时,你们的具体做法是什么呢?比如,多少克玻璃珠与多少菌体混合?如何混匀,是漩涡还是?混匀多少分钟?谢谢您的不吝赐教!
4楼2014-06-12 11:10:01
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