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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 菌种资源 » 璃珠直径≤106 μm 应该如何灭菌
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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)

[求助] 璃珠直径≤106 μm 应该如何灭菌 已有2人参与

各位大侠好！

小弟从sigma买一种玻璃珠，直径≤106 μm ， 货号G8893。现在用肉眼看为粉末状，我是想用他进行乳酸菌细胞破碎进而提取菌体DNA。但现在遇到一个问题，如何给这些粉末状的小珠子灭菌呢？说明说可以高压灭菌，但是相对湿度不可超过50%，否则玻璃珠会结块！那我应该是把玻璃珠融到水里灭菌 还是直接放入小瓶里干灭呢？或者还有其他好方法？

谢各位大侠不吝赐教，感激不尽！
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  • 附件 1 : 用玻璃珠提取基因组的方法.doc
    • 2014-06-11 14:33:27, 20 K

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1楼 2014-06-11 14:33:29
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shi16

银虫 (小有名气)
★ ★
dllchina: 金币+2, 多多交流 2014-06-11 21:56:00
我们实验室做基因组验证时，也用的sigma玻璃珠提的基因组，提酵母的。没有灭菌，直接用的，效果蛮好的。
提基因组做其他实验时，还是用的酶解法，因为担心玻璃珠会使基因组断裂。
玻璃灭的话，感觉应该干热灭菌就可以了。
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2楼2014-06-11 14:50:41
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提基因组DNA的话不用灭菌，直接用就行
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3楼2014-06-11 22:28:24
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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shi16 at 2014-06-11 14:50:41
我们实验室做基因组验证时，也用的sigma玻璃珠提的基因组，提酵母的。没有灭菌，直接用的，效果蛮好的。
提基因组做其他实验时，还是用的酶解法，因为担心玻璃珠会使基因组断裂。
玻璃灭的话，感觉应该干热灭菌就 ...

感谢回复！还想问下，用玻璃珠提取酵母的基因组时，你们的具体做法是什么呢？比如，多少克玻璃珠与多少菌体混合？如何混匀，是漩涡还是？混匀多少分钟？谢谢您的不吝赐教！
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4楼2014-06-12 11:10:01
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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lcat at 2014-06-11 22:28:24
提基因组DNA的话不用灭菌，直接用就行

不灭菌的话 是否会污染菌体 使得提取的基因组有污染呢？
我的做法是称取几克玻璃珠与菌液混合。
感谢您的回复！
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5楼2014-06-12 11:12:05
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shi16

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
陈雪爱小草: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-16 12:40:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by 陈雪爱小草 at 2014-06-12 11:12:05
不灭菌的话 是否会污染菌体 使得提取的基因组有污染呢？
我的做法是称取几克玻璃珠与菌液混合。
感谢您的回复！...

1.如果是从基因组上P基因还是灭下吧。我的菌菌落PCR效果不好，所以都是基因组验证的，只要能P出条带就行，因此没有灭菌。
2.称取几克玻璃珠，有好几种说法。玻璃珠很难称，我是1mL菌液2次离心洗涤后，加破壁缓冲液离心，加入1勺玻璃珠（超市里偶然发现的特别小的勺），大概和菌体等体积。
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6楼2014-06-12 13:48:54
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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shi16 at 2014-06-12 13:48:54
1.如果是从基因组上P基因还是灭下吧。我的菌菌落PCR效果不好，所以都是基因组验证的，只要能P出条带就行，因此没有灭菌。
2.称取几克玻璃珠，有好几种说法。玻璃珠很难称，我是1mL菌液2次离心洗涤后，加破壁缓冲液 ...

非常感谢您的回复和帮助！
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7楼2014-06-16 12:40:04
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陈雪爱小草

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shi16 at 2014-06-12 13:48:54
1.如果是从基因组上P基因还是灭下吧。我的菌菌落PCR效果不好，所以都是基因组验证的，只要能P出条带就行，因此没有灭菌。
2.称取几克玻璃珠，有好几种说法。玻璃珠很难称，我是1mL菌液2次离心洗涤后，加破壁缓冲液 ...

可以问下，您说的的意思是将1ml的菌液清洗2次后获得菌泥，再加入破壁缓冲液？？这个破壁缓冲液是什么呢？是生理盐水+与菌体同体积的玻璃珠？？加多少量呢？
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8楼2014-06-16 12:43:15
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shi16

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 陈雪爱小草 at 2014-06-16 12:43:15
可以问下，您说的的意思是将1ml的菌液清洗2次后获得菌泥，再加入破壁缓冲液？？这个破壁缓冲液是什么呢？是生理盐水+与菌体同体积的玻璃珠？？加多少量呢？...

上面顺序有点错了。网上有好几种方法的，你可以参考下我的，不知道是否适合你的菌和实验纯度要求。要求高建议用试剂盒，虽然试剂盒蛮麻烦的。
1。1ml菌液，STES洗涤菌两遍。（1遍也可以）
2。吸净上清，加30ul STES。
3。加玻璃珠，约于菌体等体积。 microprep震荡3min。
4。加200ul 氯仿/苯酚，200ul  ddH2O。
5。充分震荡混匀3分钟。高速离心10min，吸取上清至新离心管。（离心后是3层，上清约200ul）
6。加500ul  冰好的乙醇。充分混匀，离心10分钟，倒掉酒精。
7。加500ul 冰好的70%乙醇。充分混匀，离心10分钟，倒掉酒精。
8。等酒精完全挥发后，加入适量ddH2O溶解。
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9楼2014-06-17 15:48:49
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minghong222

木虫 (小有名气)
我准备做热泉沉积物宏基因组fosmid文库，现在要提基因组DNA，有师兄说在提DNA之前，用sigma公司的玻璃珠先把样品震荡一下，使细胞分散，有利于提高DNA提取质量。我想知道需要多大直径的玻璃珠啊？
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此处是知识的摇篮，解惑的圣地
10楼2014-09-23 16:28:46
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