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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 溶解曲线
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

[交流] 溶解曲线 已有4人参与

哪位高手能帮我解答下以下溶解曲线情况可能出现的原因呢，跑胶的时候是单条带，到机子上就变成这样了，不过跑胶普通pcr仪上跑了34循环，在荧光定量pcr上跑了45个循环。。。求解

溶解曲线
1.jpg


溶解曲线-1
2.jpg
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1楼 2014-06-09 00:58:59
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wuxin123

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-09 11:18:01
本帖内容被屏蔽
2楼2014-06-09 01:08:23
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuxin123 at 2014-06-09 01:08:23
图1，特异性很强，没有问题；图二感觉有引物二聚体。

谢谢回复，图二的是在目的峰后出现的峰，应该不是二聚体吧，温度八十多度了。。。。图二做了33个孔，就一个出现这种情况。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-06-09 09:47:21
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vege的桌子

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
33个孔的模板浓度都一样吗？图二是模板浓度是比较低吗？
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4楼2014-06-09 15:57:00
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-09 18:58:05
图1的溶解曲线是正常的，非常好的溶解曲线的。图二的不好说的，即使是3个孔只出现了这个，肯定是你的模板或者引物那个地方出现了问题的。
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5楼2014-06-09 16:01:02
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by vege的桌子 at 2014-06-09 15:57:00
33个孔的模板浓度都一样吗？图二是模板浓度是比较低吗？

都一样的，就是处理方式不一样而已，之前别的基因偶尔也有这种情况
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6楼2014-06-09 17:56:19
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangy0908 at 2014-06-09 16:01:02
图1的溶解曲线是正常的，非常好的溶解曲线的。图二的不好说的，即使是3个孔只出现了这个，肯定是你的模板或者引物那个地方出现了问题的。

会不会是模板的问题，之前做标准曲线的时候，只有原浓度和5倍稀释的模板出了扩增曲线，25倍以上稀释都没有扩增，这个基因的表达本来就不高。我正式做的时候，是十倍稀释的，都出了扩增，就是有一个孔出现了这个。。。
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7楼2014-06-09 17:59:11
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)
★
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看起来图二的小峰值跟图一的位置很像，有没有可能是加样的时候有引物污染呢
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8楼2014-06-10 09:38:43
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 炭笔橡皮 at 2014-06-10 09:38:43
看起来图二的小峰值跟图一的位置很像，有没有可能是加样的时候有引物污染呢

图二和图一不是一个基因哦，你是说图二有引物污染还是图一呢
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9楼2014-06-10 15:48:37
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
9楼: Originally posted by lanlvmaomao at 2014-06-10 15:48:37
图二和图一不是一个基因哦，你是说图二有引物污染还是图一呢...

图二啊，图一的曲线挺好的啊
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10楼2014-06-11 09:04:19
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