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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

[交流] 溶解曲线 已有4人参与

哪位高手能帮我解答下以下溶解曲线情况可能出现的原因呢,跑胶的时候是单条带,到机子上就变成这样了,不过跑胶普通pcr仪上跑了34循环,在荧光定量pcr上跑了45个循环。。。求解

溶解曲线
1.jpg


溶解曲线-1
2.jpg
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wuxin123

禁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-09 11:18:01
本帖内容被屏蔽

2楼2014-06-09 01:08:23
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuxin123 at 2014-06-09 01:08:23
图1,特异性很强,没有问题;图二感觉有引物二聚体。

谢谢回复,图二的是在目的峰后出现的峰,应该不是二聚体吧,温度八十多度了。。。。图二做了33个孔,就一个出现这种情况。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-06-09 09:47:21
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vege的桌子

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
33个孔的模板浓度都一样吗?图二是模板浓度是比较低吗?
4楼2014-06-09 15:57:00
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wangy0908

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-09 18:58:05
图1的溶解曲线是正常的,非常好的溶解曲线的。图二的不好说的,即使是3个孔只出现了这个,肯定是你的模板或者引物那个地方出现了问题的。
5楼2014-06-09 16:01:02
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by vege的桌子 at 2014-06-09 15:57:00
33个孔的模板浓度都一样吗?图二是模板浓度是比较低吗?

都一样的,就是处理方式不一样而已,之前别的基因偶尔也有这种情况
6楼2014-06-09 17:56:19
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangy0908 at 2014-06-09 16:01:02
图1的溶解曲线是正常的,非常好的溶解曲线的。图二的不好说的,即使是3个孔只出现了这个,肯定是你的模板或者引物那个地方出现了问题的。

会不会是模板的问题,之前做标准曲线的时候,只有原浓度和5倍稀释的模板出了扩增曲线,25倍以上稀释都没有扩增,这个基因的表达本来就不高。我正式做的时候,是十倍稀释的,都出了扩增,就是有一个孔出现了这个。。。
7楼2014-06-09 17:59:11
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看起来图二的小峰值跟图一的位置很像,有没有可能是加样的时候有引物污染呢
8楼2014-06-10 09:38:43
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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 炭笔橡皮 at 2014-06-10 09:38:43
看起来图二的小峰值跟图一的位置很像,有没有可能是加样的时候有引物污染呢

图二和图一不是一个基因哦,你是说图二有引物污染还是图一呢
9楼2014-06-10 15:48:37
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炭笔橡皮

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by lanlvmaomao at 2014-06-10 15:48:37
图二和图一不是一个基因哦,你是说图二有引物污染还是图一呢...

图二啊,图一的曲线挺好的啊
10楼2014-06-11 09:04:19
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