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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助农杆菌转化植物检测
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaoli8609

银虫 (小有名气)

[交流] 求助农杆菌转化植物检测

我把植物内源基因转入农杆菌然后再转化植物，请问在检测时 我是要提取RNA反转录后的CDNA作模板进行PCR检测还是可以直接提取DNA作模板直接检测？还有检测方法除了抗生素筛选和 PCR外还有什么方法？
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1楼 2008-03-22 15:49:56
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jerome711

银虫 (小有名气)
抗生素筛选就很方便的阿。
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做懂得生活的人
2楼2008-03-22 21:44:47
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reasonspare

木虫 (著名写手)
最好一步到位,
northern
或者

realtime

别的都是Postive
你还得做这一步/
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大慈大悲观世音救苦救难观世音有求必应观世音普渡众生观世音千手千眼观世音官大敢管观世音无处不在观世音普观普长观世音南无观世音菩萨
3楼2008-03-23 02:55:59
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xiaoli8609

银虫 (小有名气)
northern我们这里没条件，realtime做起来比较麻烦，而且成本较高。所以我想是不是PCR检测目的基因会好一些？那么用植物提出的DNA可以直接作模板还是要RNA反转录才可以？谢谢哦！
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4楼2008-03-23 17:43:31
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liudeng821111

木虫 (正式写手)

请教楼主

reasonspare(金币+0,VIP+0):最好,说详细,然后重新开帖, 很少人会翻倒最后看问题.
我也是用农杆菌转化植物（苜蓿），不过还没做到楼主这一步，正在进行转化中，将近半年还没成功，想请楼主赐教以下两个问题：1.您用农杆菌浸染的是外植体还是愈伤组织？浸染时间是多少？2.促进愈伤组织生芽的激素是什么，比例是多少？
      谢谢！预祝楼主实验成功！
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5楼2008-03-23 18:30:52
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xiaoli8609

银虫 (小有名气)
不好意思，我还没有做到那一步。我打算用浸花法，不需要组培那一块的。
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6楼2008-03-25 17:15:13
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
农杆菌转化植株检测目前有很多水平的检测方法，核酸水平、转录水平、翻译水平等。核酸水平的直接就用PCR检测就可以了，不过存在假阳性问题，最可靠的是Southern杂交检测。而你说的反转录是在转录水平的检测方法，不过转录水平最可靠的还是Northern杂交。翻译水平的检测主要就是ELASA检测了。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
7楼2008-03-26 10:14:33
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by liudeng821111 at 2008/3/23 18:30:
我也是用农杆菌转化植物（苜蓿），不过还没做到楼主这一步，正在进行转化中，将近半年还没成功，想请楼主赐教以下两个问题：1.您用农杆菌浸染的是外植体还是愈伤组织？浸染时间是多少？2.促进愈伤组织生芽的激素是 ...

对于你的问题，农杆菌转化不同的材料可能存在的条件不同，所以你需要查阅文献，看看文献中别人是怎么做的，或是自己先做一下预备试验，摸索适合转化的合适的外植体、浸染时间及激素浓度配比。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
8楼2008-03-26 10:21:38
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xiaoli8609

银虫 (小有名气)
谢谢各位给我的建议，使我受益匪浅，又知道了很多新的知识，希望能得到大家更多的在这方面的指导！谢谢了！高手们，继续指导我吧！
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9楼2008-03-28 17:36:25
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
其实可以用PCR来鉴定,不过一定要保证你的引物相当特异,或者P抗性基因也好,不过抗性基因做出来也不能说明你的是对的,最好还是做一个southern blot ,毕竟你以后要选单拷贝的来做后面的实验,才会有说服力
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10楼2008-03-28 18:33:57
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