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shellyxss

金虫 (正式写手)

[求助] 做酶切的筒子们进来看看吧已有5人参与

今天用限制性内切酶切细菌的全基因组,结果是这样的:1 -3是用不同的限制性内切酶酶切后的结果,4是细菌的基因组,这个图是不是说明酶切效果不佳啊?另外为什么1的最上面那个条带那么亮啊,还有细菌的全基因组电泳后的结果应该是这样的嘛?

做酶切的筒子们进来看看吧
20140607 酶切5min结果.png
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hailunl

金虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by shellyxss at 2014-06-08 14:24:52
DNA为什么会降解啊?
还有为什么最亮的是蛋白啊。。。...

你苯酚,氯仿抽提时候,没做好,估计吸上清时候吸到中间层了,中间层是蛋白。你可以多抽提一次。
蛋白为什么会降解?
这个涉及到很多问题,我是做植物的,造成降解原因一般为:1、磨样时候,样完全解冻了,裂解液还没加;DNA 酶Ⅰ活性恢复,造成降解;2、配置裂解液的tris等没调PH,或者PH没调对,造成DNA提不出来或者降解,如果用试剂盒那就不是这个原因了;3、回收操作细节造成降解,TE有问题,不过dd水溶解就可以了,特别对于酶切,这很重要。
不知道你懂了没有,现在一知半解人真多,都网上瞎指导。
多看看朱玉贤和郑用琏的分子生物学,最基础的很重要。
12楼2014-06-08 18:49:52
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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shellyxss: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-08 14:22:37
貌似细菌基因组都没提好哦,至少让我见到那条带啊,RNA也不除干净,酶切后没法判断的

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-08 11:52:09
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jmmchen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么要酶切基因组DNA呢,有什么意义吗
面朝大海,春暖花开
3楼2014-06-08 12:47:20
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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shellyxss: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-08 14:23:26
提取的DNA质量胎差了吧,,重新提取吧。
4楼2014-06-08 12:54:39
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