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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教关于ELISA检测
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lingbao398

金虫 (正式写手)

[交流] 请教关于ELISA检测

各位达人，请教一下，小弟在做ELISA检测时整个板都不变色，这个大概是哪儿出现问题了，过程应该是正确的，按照文献上来的啊，在此多谢了。
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1楼 2008-03-21 19:39:29
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汪洋孤舟

建议

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
1，包被浓度问题：包被浓度太低，通常每豪升1-10微克，或时间不够，通常是4度过夜（16-18小时）
2，洗涤问题，一般洗涤5次，每次放置10余秒
3，酶标抗体：复溶后加等体积甘油放-20度保存，用前在冰箱里震荡混匀后吸取，最好不要取出来
4，显色时间：一般10-30分钟
5：包被浓度和酶标抗体稀释度需要棋盘滴定确定，过高出现非特异结合，过低就不显色了
暂且这些，因为不了解你作的是哪种ELISA及你实验的SOP，所以不好分析太多
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5楼2008-03-23 11:48:46
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lingbao398

金虫 (正式写手)
底物液放半个小时也会变黄啊，酶标抗体分装好了加了一点甘油，不会坏啊，之前做都很快显色

[ Last edited by lingbao398 on 2008-3-21 at 20:07 ]
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3楼2008-03-21 19:59:50
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lingbao398

金虫 (正式写手)
各位前辈帮帮忙啊，救急啊，现在结果出不来，老师还在催啊
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4楼2008-03-22 19:34:17
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★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
ELISA没有做好，80%都是抗体除了问题，检验一下一抗，二抗的活性也许会有帮助。

TMB的工作也pH对显色也有很大的影响，我一般会控制在5.5
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6楼2008-03-26 21:20:14
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