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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lingbao398

金虫 (正式写手)

[交流] 请教关于ELISA检测

各位达人,请教一下,小弟在做ELISA检测时整个板都不变色,这个大概是哪儿出现问题了,过程应该是正确的,按照文献上来的啊,在此多谢了。
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人


reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,如果有详细的介绍就好了
酶标抗体或底物
细推物理须行乐。
2楼2008-03-21 19:47:40
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lingbao398

金虫 (正式写手)

底物液放半个小时也会变黄啊,酶标抗体分装好了加了一点甘油,不会坏啊,之前做都很快显色

[ Last edited by lingbao398 on 2008-3-21 at 20:07 ]
3楼2008-03-21 19:59:50
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lingbao398

金虫 (正式写手)

各位前辈帮帮忙啊,救急啊,现在结果出不来,老师还在催啊
4楼2008-03-22 19:34:17
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汪洋孤舟

建议

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
1,包被浓度问题:包被浓度太低,通常每豪升1-10微克,或时间不够,通常是4度过夜(16-18小时)
2,洗涤问题,一般洗涤5次,每次放置10余秒
3,酶标抗体:复溶后加等体积甘油放-20度保存,用前在冰箱里震荡混匀后吸取,最好不要取出来
4,显色时间:一般10-30分钟
5:包被浓度和酶标抗体稀释度需要棋盘滴定确定,过高出现非特异结合,过低就不显色了
暂且这些,因为不了解你作的是哪种ELISA及你实验的SOP,所以不好分析太多
5楼2008-03-23 11:48:46
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★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
ELISA没有做好,80%都是抗体除了问题,检验一下一抗,二抗的活性也许会有帮助。

TMB的工作也pH对显色也有很大的影响,我一般会控制在5.5
6楼2008-03-26 21:20:14
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lingbao398

金虫 (正式写手)

好的,谢谢各位
7楼2008-03-31 19:58:59
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wangvswei

如果确定底物和酶标抗体匹配
你看看是不是一抗二抗不匹配
一抗是不是失活
第一步包被是不是有问题
8楼2008-03-31 20:11:10
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52921027

板没干就加样或是摔板用力过大也会有这样的现象
9楼2008-04-01 16:44:04
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