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hikozl

[交流] [求助]有关荧光光谱滤光片的基本问题

   如果我拿样品去测激发谱和发射谱时,不加滤光片时,激发谱上310nm左右有很强的峰,然后测试发射谱时,在620nm有很强的峰,这个效应究竟是怎么回事呢?还有就是滤光片究竟应该怎么选择?

[ Last edited by dnp on 2008-3-21 at 11:21 ]
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hero_gjz

金虫 (小有名气)


dnp(金币+1,VIP+0):谢谢应助……^_^
这个是光栅的倍频效应导致的。
也就是说,你光栅分出来的激发光310nm,必定会伴随620,930nm这样的光出来,所以就会检测到620nm的峰。

根据这个原理,在激发窗口选择合适的滤光片,过滤掉倍频光。
2楼2008-03-21 12:25:58
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prime2003

银虫 (小有名气)


dnp(金币+1,VIP+0):thanks ^_^
楼上说的不错,应该是单色器的二级光谱

在选择荧光滤光片时应考虑样品的情况,包括浓度、波长和荧光光谱特性等等。你这种情况,如果荧光峰在400-500nm间,一般使用一块500nm左右短波通截止滤光片就可以了。如果浓度极低且荧光峰靠近激发光波长可能还需要在短波截止,那就要用一定带宽的带通滤光片了。
3楼2008-03-21 13:47:21
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hikozl

还是有点不懂,如果荧光峰在400-500nm间,一般使用一块500nm左右短波通截止滤光片就可以了
这个500nm的滤光片是阻隔掉500nm以下的光还是以上的光?如果是阻隔掉比500nm低的光,那荧光峰在400-500nm不就被挡住了?那还怎么看荧光??
4楼2008-03-23 09:40:04
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prime2003

银虫 (小有名气)

短波通是指短波长通过,长波截止
5楼2008-03-24 21:19:26
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hikozl

那这个310nm是机器本身带有的吗?是不是我拿任何样品去都会有310nm这个峰?然后我用500nm的滤波片,就可以截住会在620nm出来的光而让400-500nm左右的荧光峰通过,对吧?但我测的是Eu相关的东西,发红光,如果把500nm以上的截掉了,那Eu的特征荧光不是都出不来?
6楼2008-04-04 16:40:05
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hikozl

这么说吧,我做的是Eu和有机物的配合物,激发谱是有机物在320左右有吸收,然后Eu在350-420nm左右有吸收.
然后出来的荧光都是Eu发的特征光谱,红光,590,620,650,690一共有四个特征峰.

那么,我应该怎样选择滤光片呢?理由是?
谢谢大家
7楼2008-04-04 16:46:02
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prime2003

银虫 (小有名气)


dnp(金币+1,VIP+0):thanks ^_^
激发峰可否在290和350以外,这样就可以让开二级谱
   如果不行,就要确定样品的量子产率和浓度,如果是强荧光高浓度,可以试试把激发和发射单色器带宽调到最低,应该是2nm,再把激发波长放在302或317(激发的二级谱不要在发射峰上),这样二级谱会低些,扣掉背景后影响不会很大。
   还不行,就花点钱买一块好点的干涉滤片隔一下。
8楼2008-04-07 09:22:43
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