应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 有人在做BiFC吗？
162/2返回列表上一页12
查看: 7613  |  回复: 52
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

鸦米

新虫 (小有名气)

[交流] 有人在做BiFC吗？ 已有16人参与

因为我近期要做BiFC,我们实验室之前没有人做过，所以想请教曾经做过的朋友一些问题，哪位做过可以交流一下吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-06-04 11:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
28楼: Originally posted by gyesang at 2014-06-09 10:36:12
看了那篇关于BiFc的nature protocol上的文章，外源表达量与内源的表达量相当的话比较好，如果外源的表达量过大的话，会不会产生背景？...

我觉得多少会有一定干扰，但程度如何，恐怕得具体问题具体分析
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
30楼2014-06-09 16:11:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
31楼: Originally posted by 赵小花90 at 2014-06-10 11:11:03
你好，我最近在做烟草的原生质体，可是最近发现转化之前镜检原生质体都挺好的，为什么转化后次日看结果时基本上都是一坨一坨的黑色物质，而且可以看到此时的原生质体都是黑色颗粒了，还不太清楚是什么原因导致，希 ...

上图片看看吧，最好把试验方法也描述一下
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
32楼2014-06-10 16:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:27:50
引用回帖:
33楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 13:34:12
你好，我最近在做BiFC，阴性对照也有荧光，而且很亮很多，我得阴性对照是两个空载体，请问这种情况你是怎么解决的，希望能帮我解答一下，谢谢...

你做的什么材料，动物细胞的话我帮不上忙。做BIFC有时候要看材料细胞质量和状态，另外，合适的confocal设定也很重要。如果你的两个空载有荧光，什么都不转的细胞有荧光么？
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
36楼2014-08-16 18:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
37楼: Originally posted by 泡菜肉丝 at 2014-08-16 20:05:32
我的是293T细胞，细胞新买的，状态很好，我还没照confocal，我先用正置的显微镜预实验，结果就出现这样的情况了，什么都不转没有荧光，请问你做植物细胞怎么做对照？...

我们设置几个不同的对照，比如什么都不转的细胞，只转入空载的细胞，在载体上插入对照蛋白（比如我们用过的iLOV）等，有兴趣你可以参照实验室13年发的文章
Karnik et al. The Plant Cell  2013 Apr;25(4):1368-82
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
38楼2014-08-17 03:03:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
43楼: Originally posted by llyycc at 2014-09-19 08:52:40
您好，我想请问一下虫友，你做BiFc用Gateway的入门载体没有？还是就通过普通的重组载体构建的方法，先把目的基因克隆到克隆载体上，然后再双酶切回收与pSPYCE, pSPYNE对应的双酶切回收片段连接？...

我们的载体系统是基于gateway做的，包括BIFC载体，不用酶切回收，BP-LR反应就能完成克隆工作。
参见
Grefen, C. and Blatt, M.R. (2012). A 2in1 cloning system enables ratiometric bimolecular fluorescence complementation (rBiFC). Biotechniques 53: 311-314.
Karnik, R., Grefen, C., Bayne, R., Honsbein, A., Köhler, T., Kioumourtzoglou, D., Williams, M., Bryant, N.J., and Blatt, M.R. (2013). Arabidopsis Sec1/Munc18 Protein SEC11 Is a Competitive and Dynamic Modulator of SNARE Binding and SYP121-Dependent Vesicle Traffic. Plant Cell 25: 1368-1382.
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
44楼2014-09-20 15:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 鸦米 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭