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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RNA逆转录求助
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qdvod

[交流] RNA逆转录求助

我提取的细胞总RNA稀释50倍后测定OD值，OD260/OD280比值为1.751，计算浓度用1ug为模板进行逆转录，引物是随机引物六聚体（0.25µg/µl）1ul，同时做了试剂盒里面的阳性对照。结果对照逆转的很漂亮，提取的RNA却什麽也没逆转出来。已经重复了多次，都是这样的结果，请教各位高手问题出在哪里？是不是提取的RNA不够纯，量太少？我是用微量RNA提取试剂盒提取的。
谢谢！不胜感激！！
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1楼 2008-03-20 23:02:08
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weiwei1

木虫 (小有名气)
RNA应该测OD230吧
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2楼2008-03-21 09:25:00
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傻子

木虫 (正式写手)
可能问题出在提的RNA不够纯，OD上看有点偏低了。一般反转录不需要很大量的，有一次我提的RNA电泳基本没见条带，但是照样能转出来。
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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
3楼2008-03-21 12:26:56
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cosmosmid

新虫 (小有名气)

the problem is your primer

you may use the OligodT as your primer, then, you must design your primer based on the length of your cDNA
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4楼2008-03-21 16:14:29
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