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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增全长
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由淑贞

银虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增全长

各位大虾,现急需你们的帮助:
    我在基因全长2100bp扩增,测序结果的5'端,有不少碱基错配,但是3'端1000多碱基与拼接序列相同.并且与拼接的序列比较ORF改变.我是用的是宝生物的普通Taq酶.这可能是那些原因造成的!
          盼望大家多多支招,  谢谢大家了!
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1楼 2008-03-20 21:04:04
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
如果想做基因表达,最好用pfu扩增,觉得TA克隆不容易，可以在两侧设计酶切位点。农大张宪省和郑成超老师那边应该高手多多阿
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2楼2008-03-20 21:54:09
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
如果你的克隆基因很长的花，用普通的Taq酶肯定会出现错物，如果你涉及到蛋白的表达，应该选择保真性高点的酶，你可以咨询公司一下，可以使用pfu。好像宝生物有专门扩增长序列的酶
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3楼2008-03-21 09:53:51
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Kiddy

金虫 (小有名气)
如果要测序的话，你最好用ExTaq或LA，保真性比较好！
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4楼2008-03-21 10:26:26
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由淑贞

银虫 (小有名气)
谢谢大家的帮助
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5楼2008-03-24 19:52:39
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