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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » CAT同工酶测定染色问题
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外国羊

铜虫 (初入文坛)

[求助] CAT同工酶测定染色问题 已有1人参与

我做了快一个月的过氧化氢酶同工酶染色，用铁染色方法，染出来很浑浊，但看到网上有这种方法，具体步骤如下：

A液: 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸缓冲液 5ml，0.1 mol/L 硫代硫酸钠 3.5 ml， 3％ 过氧化氢25 ml。
B液：0.09 mol/L KI 25 mL，蒸馏水25 ml。
先用A液浸泡 15分钟后，水洗，再用B液浸泡。

此方法需在分离胶中加0.5%的可溶性淀粉，加入量是多少？
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1楼 2014-06-01 11:08:53
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懒小笨笨

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
外国羊: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-08-27 16:04:16
你试下这种方法：0.01%H2O2染色5min，去离子水冲洗两遍，1%Fecl3和1%K3[Fe(CN)6]染色5min，效果不错
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2楼2014-08-27 12:15:17
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碧水逸景

新虫 (初入文坛)
不知道你现在还需要这个不，我也在做过氧化氢酶。我用过下面提供的方法，但是效果也不好。我用的是：
1%可溶性淀粉溶于沸水中至无色透明，脱胶在此溶液中4℃浸泡1小时40分。倾出淀粉液加入0.5%双氧水，室温静置1分钟，双蒸水漂洗几次，加入0.5%碘化钾溶液（1g用双蒸水定容至200ml，加1ml冰醋酸使之酸化），将漂好的胶片放入。室温下逐渐变成蓝色，酶活处无色透明，清洗后立即以蒸馏水漂洗，以防带缺失。
不过这个我做的并不只有透明带，还有蓝色的条带。染色时几分钟就可以了额，稍不注意就染过头了。
希望会有帮助，估计你现在都用不上了吧。
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3楼2014-12-23 21:20:02
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那一年935

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 懒小笨笨 at 2014-08-27 12:15:17
你试下这种方法：0.01%H2O2染色5min，去离子水冲洗两遍，1%Fecl3和1%K3染色5min，效果不错

麻烦问一下，你在染色过程中有没有出现蓝色条带的情况？我所做的染色背景不是很深，然完之后有亮带，也有蓝色条带，用的就是你说的这种方法
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4楼2016-06-04 12:34:47
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