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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请问在细胞外面有mRNA吗？
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anmengqu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-01 00:08:37
有可能少量细胞被你弄破了也有可能的

弄破了的话，RNA应该很容易被降解了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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11楼2014-06-01 08:35:02
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by anmengqu at 2014-06-01 08:35:02
弄破了的话，RNA应该很容易被降解了。
...

RNA没有想象中那么容易降解，PCR还是会检测到的

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2014-06-01 09:07:27
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by BioChen at 2014-06-01 06:31:36
出现这样的情况，只能是一步步设计实验，找到原因。比如拿你的细胞cDNA和洗脱液反转录产物为模板，做一个普通PCR，看看有没有条带。除了用你目的基因的引物，还做下内参吧...

条带肯定是有的，因为荧光定量结果显示有，而且溶解曲线很好，说明没有非特异性条带。。。你说我测一下反转录出来的样品cDNA浓度如何，若结果与反转录时RNA上样量差别很大就说明RNA有问题或反转录失败了？
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
13楼2014-06-01 11:36:22
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by anmengqu at 2014-05-31 23:51:31
你在洗涤过程中会不会存在操作不好的问题呢？洗三遍，操作不好有可能细胞已经处于脆弱状态，很容易有细胞缩起并飘起来，收集的回收液里就有细胞存在了。那就会提出RNA了不是？
...

嗯~洗脱液中有悬浮起来的细胞和死细胞是不可避免的，我是纠结洗脱液中mRNA的量为什么会和细胞中的mRNA量一样，理论上是洗脱液中mRNA的量远低于细胞中的表达量才对
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
14楼2014-06-01 11:41:43
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by anmengqu at 2014-06-01 00:02:33
还有一种情况就是你在逆转加样时会不会被污染了

怎么解释，是说细胞中的mRNA和洗脱液的mRNA加混了吗
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
15楼2014-06-01 11:43:38
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-01 00:08:37
有可能少量细胞被你弄破了也有可能的

嗯，这个应该是肯定的，即使洗的再干净，洗脱液中肯定还有细胞或死细胞，但是洗脱液中mRNA的表达量和细胞中的都差不多。。。这就很无语。。。
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
16楼2014-06-01 11:45:39
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2014-06-01 00:37:52
细胞外没有这个吧！感觉是培养的细胞在处理前或处理过程中出现裂解！或者是污染什么的！难道内参也是一样的表达量！楼主再仔细想想试验过程，多问问做过的人！

我做的是绝对定量，木有内参，有没有文献什么的可以说明一下细胞外到底有没有mRNA呢？
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
17楼2014-06-01 11:47:14
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anmengqu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by xiaohaixie at 2014-06-01 11:43:38
怎么解释，是说细胞中的mRNA和洗脱液的mRNA加混了吗...

有没有存在加样的问题？感觉唯一的可能就是加样问题了，除非你的药品已经有被污染了。
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18楼2014-06-01 11:55:02
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就目前的人类的生物学科的理论认识水平，这里还是一个，往上抛一个苹果，不见得会落地，说不定会飞向月亮的世界。任何事情都有可能发生，比如细胞外有点什么RNA，很有可能啊，问题是你要用“科学”的方法得出这个结论才行。
PBS洗洗细胞，细胞有点破了，RNA释放出了有污染这是肯定存在的，或者，培养基里面的血清成分残留也是有可能的。至于PCR是否操作上还有点问题，那就是你的事情了。如果你发现了一个惊天动地的事情，现在你要做的就是，如果让世人接受，设计一点合理且严谨的实验吧。
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19楼2014-06-01 23:44:58
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
扯吧，从细胞里提RNA还怕细胞不够多，洗液里还能提取到足量的RNA？
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20楼2014-06-03 19:09:57
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