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[求助]
这个问题让俺很困扰。。。
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最近构建质粒，用的是Gibson Assembly ， 具体也不必赘述。问题在于我从抗性板子上挑取单菌落PCR验证时，出现了阳性克隆子应该有的1000bp大小的条带（对照没有，且成功率也不是很高）。 做到这，当然很高兴，赶紧将单菌落摇起来并保种提质粒，得到质粒载体后，为了保险就又PCR一次，打算送去测序。这就来问题了！！！！不管我怎么调节退火温度和反应体系的用量，总是出现该死的2000bp的条带！！！！问题在于就算是我没有构建成功也不应该出现2000的条带！！！而且我怀疑的ddH2O有问题也被对照没有条带给否决了！！！！而且我想测一下这个2000bp的条带是什么，测序公司测了好多次都没信号！！！我擦，这是幽灵一般的一个2000bp呀！ 当然我也想过用一些其他的方法来确认一下自己的质粒是否构建成功，但是总归没有测序保险。。。这里赘言牢骚一通，就是想问大家有没有过相似的经历，或者大牛有没有能分析一下的。。。 谢谢！ |
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