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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因组DNA的部分酶切
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沧海蝴蝶

[交流] 基因组DNA的部分酶切

我现在准备用sau3A1部分酶切细菌的基因组DNA，对部分酶切的反应时间、加入酶的量以及样品DNA的质量浓度不知道怎么确定，它们对酶切效果的影响是怎样的，还有买回的酶里带的缓冲液用时需不需要再稀释？想听听大家的宝贵经验，会对我的实验有很大的帮助。先谢谢了！
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1楼 2008-03-19 20:04:37
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biocore

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
部分酶切就似乎，在完全酶切的基础上，酶用量减少，酶切时间减少。
至于具体减少多少，达到你的实验效果，要自己摸条件。
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2楼2008-03-19 22:21:47
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qianxibanli

铜虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
做几个平行，酶量一样，不同的切割时间梯度，进行酶切，最后电泳看一看你所要求的片断范围那个更复合。
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3楼2008-03-19 22:29:59
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elton_monkey

银虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx,如果有详细的介绍就好了
部分酶切必须要摸条件，一般会做一个酶浓度和酶切时间两个变量。不过看你估计是要建DNA文库，其实可以买个机械打断基因组DNA的试剂盒，效果还不错，比用部分酶切花时间少多了。
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4楼2008-03-19 22:54:19
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nnfyw

木虫 (著名写手)
买个机械打断基因组DNA的试剂盒哪里有的卖啊，多少钱啊
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5楼2008-03-19 23:26:17
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elton_monkey

银虫 (初入文坛)
你就查查Fosimid library建库试剂盒，多少钱不清楚，好像几千吧
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6楼2008-03-20 09:49:39
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hotdunk

金虫 (正式写手)
时间和酶量都要摸索的，真不一定，我做的时候结果和所查文献大相径庭的~
同意三楼的建议~
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爱情来得快去得也快，只有猪肉卷是永恒的！
7楼2008-03-20 10:07:40
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sm_honker

木虫 (小有名气)
2U sau3A1 5ug DNA for 1,2,5,10,15 MIN TEST TOTAL 150UL
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8楼2008-03-20 11:10:22
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