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随游

木虫 (正式写手)

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[交流] 细胞冻存有遇到过这些问题吗？

很多珍贵的细胞株，冻存后很难复苏，或者复苏后出现大量死亡，不知大家都是怎么处理的，是否解决了这些问题？
我先说说我最近遇到的问题吧。
培养物：杂交瘤细胞
冻存液：90%FBS+10%DMSO
冻存过程：(泡沫盒) -70℃过夜→转液氮保存
复苏过程：40℃水浴→90s内，溶解→1500 rpm，3 min→弃上清，培养基重悬→T75培养瓶培养，5% CO2,37℃，DMEM+20%FBS+双抗
问题：部分细胞复苏之后，大量死亡，有的甚至全部死亡；此类细胞中，部分细胞复苏起来后死的就很多，部分细胞过几个小时后死亡
作出的努力：1、在添加饲养细胞的24孔板内复苏，能抢救一部分，但耗时
2、冻存数目增加，占的位置太多，且仍然不能解决
3、试过不同的冻存液配方，FBS20%、50%、90%都没有明显的改善
最近一次发现，-70保存后复苏比液氮保存后复苏的效果要好很多，这说明我在转液氮的时候出问题了么？可是不是很明白会出啥问题呢~~
请大家都来说一说哈！

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