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lanlvmaomao

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增效率 已有1人参与

本人最近做荧光定量PCR,因为几次做的目的基因表达趋势不大对,于是做了下引物的标准曲线,看看扩增效率。做了四个基因,包括内参,标准曲线的斜率都是-2.6~-2.8之间。。。。扩增效率很高。。。NTC无模板对照有扩增,溶解曲线显示荧光阈值很低,怀疑是二聚体,但是样本的溶解曲线并未见到明显二聚体或非特异性扩增。。。NTC的ct值为40。求教,这种情况我该怎么办。。。真的不想换引物啊,
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houliming

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-05-25 18:57:38
一换水,二可能样品重复性不好,注意生物学重复样品制备的一致性。好的实验结果一定都能重复出来,三换染料,四看机器有些孔是不是一直都不好,不排除孔有问题,五,跨外显子引物,排除DNA 污染,同时也的注意反转录效率一致性。总之每步都要严谨,做好记录。出问题了好排除。

[ 发自小木虫客户端 ]
天下之事,必作于细!
2楼2014-05-25 02:07:23
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