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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 求助-质粒酶切的问题

最近切质粒做转化,单切或者双切的时间大概是3-5个小时,按理说应该足够,可是每次转化完后长出的单斑提取质粒却都是和原始质粒一样大小,根本没有转化子,难道是我酶切的时间不够吗?

可是很多人都说切上2个小时就足够了啊。

每次都是这样。。。。。。。。
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huoxingshizhe

铁虫 (小有名气)

没太看明白。是不是从质粒上切下一段,连接其他载体,转化?
还是质粒线性化转化?
2楼2008-03-17 11:28:54
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mark32280667806

楼主,没有把实验的情况介绍清楚啊,大家也不好给你意见啊
3楼2008-03-17 14:33:08
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hotdunk

金虫 (正式写手)

没看懂~ 详细说说吧~
爱情来得快去得也快,只有猪肉卷是永恒的!
4楼2008-03-17 15:50:33
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
引用回帖:
Originally posted by guoqin_shiyin at 2008-3-17 03:15:
最近切质粒做转化,单切或者双切的时间大概是3-5个小时,按理说应该足够,可是每次转化完后长出的单斑提取质粒却都是和原始质粒一样大小,根本没有转化子,难道是我酶切的时间不够吗?

可是很多人都说切上2个 ...

酶切后连接吧。酶量要适合,也不知道体系?一般切1ug DNA就够了,过夜酶切也可以试一试。
问题很有可能是连接,连接DNA与质粒摩尔比很重要,条件按说明书。
——穿越死亡之门,到我这里来,虽则梦想褪色,岁月集成的果实腐烂掉,但我是永恒的真理,你将再会见我,在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
5楼2008-03-17 18:17:06
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

我是把质粒和片段双切后连接,一般切上三个小时多,可是这几次长出来的都是假阳性,把酶切时间提高到五个小时还是一样,不知道为什么。

如果说是没有切完全,那么长出来的十几个单斑为什么全是假的呢?
6楼2008-03-17 23:49:48
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