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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助－质粒酶切的问题
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 求助－质粒酶切的问题

最近切质粒做转化，单切或者双切的时间大概是3－5个小时，按理说应该足够，可是每次转化完后长出的单斑提取质粒却都是和原始质粒一样大小，根本没有转化子，难道是我酶切的时间不够吗？

可是很多人都说切上2个小时就足够了啊。

每次都是这样。。。。。。。。
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1楼 2008-03-17 03:15:00
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huoxingshizhe

铁虫 (小有名气)
没太看明白。是不是从质粒上切下一段，连接其他载体，转化？
还是质粒线性化转化？
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2楼2008-03-17 11:28:54
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mark32280667806

楼主，没有把实验的情况介绍清楚啊，大家也不好给你意见啊
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3楼2008-03-17 14:33:08
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hotdunk

金虫 (正式写手)
没看懂~ 详细说说吧~
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爱情来得快去得也快，只有猪肉卷是永恒的！
4楼2008-03-17 15:50:33
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
引用回帖:
Originally posted by guoqin_shiyin at 2008-3-17 03:15:
最近切质粒做转化，单切或者双切的时间大概是3－5个小时，按理说应该足够，可是每次转化完后长出的单斑提取质粒却都是和原始质粒一样大小，根本没有转化子，难道是我酶切的时间不够吗？

可是很多人都说切上2个 ...

酶切后连接吧。酶量要适合，也不知道体系？一般切1ug DNA就够了，过夜酶切也可以试一试。
问题很有可能是连接，连接DNA与质粒摩尔比很重要，条件按说明书。
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——穿越死亡之门，到我这里来，虽则梦想褪色，岁月集成的果实腐烂掉，但我是永恒的真理，你将再会见我，在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
5楼2008-03-17 18:17:06
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
我是把质粒和片段双切后连接，一般切上三个小时多，可是这几次长出来的都是假阳性，把酶切时间提高到五个小时还是一样，不知道为什么。

如果说是没有切完全，那么长出来的十几个单斑为什么全是假的呢？
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6楼2008-03-17 23:49:48
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