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亚瑟王1987新虫 (初入文坛)
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用多肽包板子检测病毒出现假阳性 已有2人参与
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我用一种能够吸附病毒的小分子多肽包板子，包备液用的是普通的碳酸氢盐包被液，多肽浓度为100μg/ml.然后用含0.5％的BSA，0.05％的Tween-20PBS作封闭液（也试过脱脂牛奶，胎牛血清，提高BSA浓度），封闭1个小时（也试过过夜封闭）， 用洗涤液洗三次，然后加入病毒（大概10^8PFU/ml）100μl孵育1h,洗涤三次，加入抗病毒的阳性血清孵育1h，洗涤三次，最后加入HRP标记的二抗孵育1h，洗涤5次，然后用显色液显色。 问题是当我用什么都不含的包被液包板子作阴性对照，其它都不变时，会出现阳性，OD值为1.0左右挺高的，所以我想是不是封闭的不充分，所以病毒总会吸附到板子上。也用不含病毒的细胞悬液作对照，结果OD值是阴性不超过0.3.所以好像只要加病毒就会出现阳性，不管我包被了什么东西没有。看看大家有没有什么办法可以解决这个问题。谢谢！ |
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6楼2014-05-22 16:22:24
kaobo2012
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3楼2014-05-19 16:15:02
亚瑟王1987
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5楼2014-05-22 16:20:19
