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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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亚瑟王1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 用多肽包板子检测病毒出现假阳性 已有2人参与

我用一种能够吸附病毒的小分子多肽包板子,包备液用的是普通的碳酸氢盐包被液,多肽浓度为100μg/ml.然后用含0.5%的BSA,0.05%的Tween-20PBS作封闭液(也试过脱脂牛奶,胎牛血清,提高BSA浓度),封闭1个小时(也试过过夜封闭), 用洗涤液洗三次,然后加入病毒(大概10^8PFU/ml)100μl孵育1h,洗涤三次,加入抗病毒的阳性血清孵育1h,洗涤三次,最后加入HRP标记的二抗孵育1h,洗涤5次,然后用显色液显色。
问题是当我用什么都不含的包被液包板子作阴性对照,其它都不变时,会出现阳性,OD值为1.0左右挺高的,所以我想是不是封闭的不充分,所以病毒总会吸附到板子上。也用不含病毒的细胞悬液作对照,结果OD值是阴性不超过0.3.所以好像只要加病毒就会出现阳性,不管我包被了什么东西没有。看看大家有没有什么办法可以解决这个问题。谢谢!
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学海
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
亚瑟王1987: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-01 23:04:24
是不是病毒跟BSA结合?换下封闭液,比如酪蛋白。不过,阴性对照,最好不要用什么都没有的包被液。最好用其他蛋白,一般都用同源蛋白做阴性对照,说明其特异性。加病毒时,你也可以做个梯度,看看是不是浓度过高的原因。
3楼2014-05-19 16:15:02
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亚瑟王1987

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kaobo2012 at 2014-05-19 16:15:02
是不是病毒跟BSA结合?换下封闭液,比如酪蛋白。不过,阴性对照,最好不要用什么都没有的包被液。最好用其他蛋白,一般都用同源蛋白做阴性对照,说明其特异性。加病毒时,你也可以做个梯度,看看是不是浓度过高的原 ...

谢谢
学海
4楼2014-05-20 09:33:11
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vetzhang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

确实如果包被液做阴性对照,容易 出现假阳性,给你用脱脂乳 酪蛋白 BSA PVA 明胶等封闭剂封闭关系不大,建议像3楼说的,用同源或异源蛋白包被试试看吧。
5楼2014-05-22 16:20:19
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vetzhang

金虫 (小有名气)

你这种情况下若该做斑点ELISA一般不会出现假阳性
6楼2014-05-22 16:22:24
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