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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 2金币求助：胶回收的问题
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zhouxiaomin

铜虫 (小有名气)

[交流] 2金币求助：胶回收的问题

我想胶回收目的片段，可是酶切以后所需片断和剩余片段大小差不多，一个5.1kb,一个4.78kb,跑得不是很开，影响切割。怎样解决这个问题呢？提高胶浓度可以做到吗？我昨天跑了个1.0%的胶，结果还是不好切。哪位大侠给出出主意呢？谢谢了
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1楼 2008-03-16 10:08:43
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annwt

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
应该有长的胶板，可以跑长些。
时间也可以长些，我跑过20－40伏的，时间相当长，就是为了区分。
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2楼2008-03-16 10:22:01
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hotdunk

金虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
两个片段都比较大加大胶浓度可能效果也不会很好，个人认为可以减少DNA的量或稍微加大酶量或者延长一定作用时间使酶切完全，减少干扰带，另外就是延长电泳时间增加电泳距离，看看能不能分开~
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爱情来得快去得也快，只有猪肉卷是永恒的！
3楼2008-03-16 10:24:02
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
能跑脉冲电场电泳吗？如果可以，加大凝胶浓度应该管事！
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细推物理须行乐。
4楼2008-03-16 12:32:29
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s0ngxia085

金虫 (正式写手)
同意2，3楼，加大胶浓度，低电压，长时间。
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5楼2008-03-17 13:50:25
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mark32280667806

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
用2%的高浓度，跑长胶，我用这样的方法，80bp的PCR产物，和引物二聚体，都分开过
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6楼2008-03-17 14:31:36
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zhouxiaomin

铜虫 (小有名气)
可是这两个都是大片段，我昨天用1.5%胶浓度 、长坂子跑过，效果还是不好啊
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7楼2008-03-17 17:15:19
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
还是试试脉冲场电泳吧，那么大的片段，用那么硬的胶，结果很难说。
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金币是赌出来的
8楼2008-03-18 13:39:45
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totoro一家亲

铜虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 关注,.
reasonspare(金币+1,VIP+0):代楼主谢谢你.
大小差不多是很难分的。如果可以找到合适酶切位点的话，建议你从酶切的地方优化。
比如，你要5.1kb的片段，那就在4.8的那个上面找一个位点把它切成两个2K左右的小片段，这样跑胶就容易分开了。一定注意要是5.1kb上面没有的位点。
这样的方法比跑脉冲电泳简单些。
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9楼2008-03-18 14:45:48
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佳逸轩居士

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):代楼主谢谢你.
片段太大，脉冲电场会很好。
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10楼2008-03-18 16:54:02
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