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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 转基因烟草检测求助
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激情海洋

银虫 (小有名气)

[交流] 转基因烟草检测求助

请问大家：我的转基因烟草鉴定，提总DNA用35S和我的基因下游引物作PCR，为何野生型的总是出带？换了引物也不行，引物和buffer等都没有问题，DNA条带质量也很好。我该怎么做？不知大家遇没遇到这种情况？谢谢！
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1楼 2008-03-15 16:21:53
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P 欢迎常来交流！
专门检测35S启动子吧，或检测NOS终止子吧，或检测靶基因，或抗性基因。再从提一次模板吧，别有污染。或者你的野生型没准是转基因的呢！
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细推物理须行乐。
2楼2008-03-15 17:15:41
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xiaoyur

金虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 关注,.
楼上的说的有道理
不过现在市场上应该没有转基因的烟草种子。
我也遇见过这种现象：所有的样品都有结果，换了引物就可以了
当时我设计引物是用的是Primer5软件，选得是最好扩的那条RAT=88,最后所有的样品都有条带，而且很亮。
师姐说，如果与目的基因差异大的话，可以作为内参基因使检测更完善，说我是因祸得福！
你试着设计一条靶基因的特异引物，不求最好扩，但求特异
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爱的反义词不是恨 而是冷漠!
3楼2008-03-15 20:09:45
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
你可以测策序看到底是什么被扩出来了。
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细推物理须行乐。
4楼2008-03-15 20:25:12
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激情海洋

银虫 (小有名气)
谢谢大家的回复。我没测野生型的把什么扩出来了，我倒是测我的转基因后的苗子，表明是转进去了，但总测序不是办法，呵呵。
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5楼2008-03-16 17:04:26
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激情海洋

银虫 (小有名气)
我也试过用卡那抗性的基因NPT2，也出带，呵呵，真没办法。
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6楼2008-03-16 18:10:17
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