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globeprince

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于原核表达,急....

各位高手:

我在表达过程中遇到一个奇怪的现象,恳请高手们指点:

我表达一个含有两个基因的融合蛋白,中间用linker相连,单独表达每个基因均可表达,而二者融合后表达后的大小与理论不一致。检查ORF正确。请问会是什么问题呢?该怎样做?

先谢谢了。
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

分子量很可能有偏差的,因为SDS-PAGE中样品的速率除了跟分子量有关外,跟蛋白的高级结构也有关。
4楼2008-03-15 14:30:38
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rtli1672

金虫 (著名写手)

可能是跑的page胶的问题,可以试试换一个浓度的胶试试
2楼2008-03-15 12:05:25
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

蛋白是不是降解了?蛋白电泳除了主带还有其他的明显的带吗?
细推物理须行乐。
3楼2008-03-15 12:14:41
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globeprince

铜虫 (小有名气)

感谢各位的关注,我也怀疑是蛋白降解了,因为表达基因的条带和融合基因前面的一个基因的条带一致。蛋白应该是50kDa,而表达的只有30kDa左右。分子量的偏差不可能有那么大的。
如果是降解,是不是因为PAGE时变性的缘故,那么这样表达的话会不会有活性呢?
5楼2008-03-16 09:29:37
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