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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于原核表达,急....
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globeprince

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于原核表达,急....

各位高手：

我在表达过程中遇到一个奇怪的现象，恳请高手们指点：

我表达一个含有两个基因的融合蛋白，中间用linker相连，单独表达每个基因均可表达，而二者融合后表达后的大小与理论不一致。检查ORF正确。请问会是什么问题呢？该怎样做？

先谢谢了。
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1楼 2008-03-15 11:36:27
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rtli1672

金虫 (著名写手)
可能是跑的page胶的问题，可以试试换一个浓度的胶试试
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2楼2008-03-15 12:05:25
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
蛋白是不是降解了？蛋白电泳除了主带还有其他的明显的带吗？
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细推物理须行乐。
3楼2008-03-15 12:14:41
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
分子量很可能有偏差的，因为SDS-PAGE中样品的速率除了跟分子量有关外，跟蛋白的高级结构也有关。
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4楼2008-03-15 14:30:38
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globeprince

铜虫 (小有名气)
感谢各位的关注，我也怀疑是蛋白降解了，因为表达基因的条带和融合基因前面的一个基因的条带一致。蛋白应该是50kDa，而表达的只有30kDa左右。分子量的偏差不可能有那么大的。
如果是降解，是不是因为PAGE时变性的缘故，那么这样表达的话会不会有活性呢？
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5楼2008-03-16 09:29:37
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mark32280667806

还是先检查一下，linker 左右有没有，终止密码子，在说
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6楼2008-03-17 14:54:17
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