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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 6Kbp大小的片段怎么连接转化啊
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落风吟

新虫 (初入文坛)

[交流] 6Kbp大小的片段怎么连接转化啊

我用LA Taq 从质粒上P出6K大小的片段做模版，要连接到3K大小的骨架上，现在就是能P出来，但是连不上啊~求大神指教啊~~
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1楼 2014-05-14 17:02:39
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
在6Kb片段上找酶切位点，分成2-3段慢慢来。
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7楼2014-05-14 18:21:37
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落风吟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-05-14 18:21:37
在6Kb片段上找酶切位点，分成2-3段慢慢来。

呃~再把6K的切成2-3段然后连到骨架上吗？
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8楼2014-05-14 20:55:43
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 落风吟 at 2014-05-14 20:55:43
呃~再把6K的切成2-3段然后连到骨架上吗？...

互补载体，一般就是这样的。
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9楼2014-05-14 23:02:13
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Neo2000

木虫 (著名写手)
按常规的ta克隆做就好

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10楼2014-05-15 09:23:36
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 落风吟 at 2014-05-14 20:55:43
呃~再把6K的切成2-3段然后连到骨架上吗？...

这个主意很不靠谱，别瞎折腾啦

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11楼2014-05-15 09:24:24
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Neo2000

木虫 (著名写手)
我这边7k的片段也是这么直接ta的，没有问题，测序也OK

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12楼2014-05-15 09:25:12
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落风吟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-15 09:23:36
按常规的ta克隆做就好

常规的T3连接效率很低啊~
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13楼2014-05-17 17:13:17
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梁永喜2楼
2014-05-14 17:13   回复  
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liyangsoton3楼
2014-05-14 17:31   回复  
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neu2344楼
2014-05-14 18:05   回复  
落风吟(金币+1): 谢谢参与
kiss200855375楼
2014-05-14 18:14   回复  
落风吟(金币+1): 谢谢参与
userhung6楼
2014-05-14 18:18   回复  
落风吟(金币+1): 谢谢参与
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