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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR连接后菌液鉴定的问题
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上官尹悠

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我习惯酶切鉴定，假阳性少，菌落 PCR 假阳性太多了

[ 发自小木虫客户端 ]
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努力，追求自己的追求！
11楼2014-05-13 22:12:13
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先确认你引物和序列有多大交叉
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努力打败一切
12楼2014-05-14 00:55:58
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哈皮Bingo

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 猪尾巴草 at 2014-05-13 21:42:11
就是菌液PCR，条带是目的片段加两引物大小...

请问一下，是加上下游引物吗？这个不应该是一条是上游引物加目的片段和另一条下游引物加目的片段吗？环状质粒中间一段目的片段，分别由两个方向扩增，就像下图这样：
关于PCR连接后菌液鉴定的问题
无标题.png
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13楼2014-05-15 11:38:28
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哈皮Bingo

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 哈皮Bingo at 2014-05-15 11:38:28
请问一下，是加上下游引物吗？这个不应该是一条是上游引物加目的片段和另一条下游引物加目的片段吗？环状质粒中间一段目的片段，分别由两个方向扩增，就像下图这样：

无标题.png
...

重新上传一下
关于PCR连接后菌液鉴定的问题-1
图片.png
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14楼2014-05-15 11:41:27
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mehongyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
当然不是了，你得看引物在你载体上的位置，才能确定片段长度
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15楼2014-05-15 12:11:33
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哈皮Bingo

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by mehongyu at 2014-05-15 12:11:33
当然不是了，你得看引物在你载体上的位置，才能确定片段长度

引物是根据目的片段设计的，这个怎么看它在载体上的位置？不好意思啊，我是新手本科生，第一次做这个，问的问题比较啰嗦，谢谢你了
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16楼2014-05-15 14:33:11
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匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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17楼2014-05-15 16:37:48
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
条带大小应该是你PCR目的片段加质粒之和，建议你用提取出来的质粒为模版，用你PCR的上下游引物进行PCR，能P出条带说明连接上了，之后最好送去测序。
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自己的路，自己快乐的走
18楼2014-05-15 16:54:06
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吹着泡泡的夏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你连接上了跑胶的时候，是你两个片段的总和
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走着走着就长大了
19楼2014-05-15 17:10:00
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