应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长引物一直P不出目的条带来，请大神看一下我的引物设计有没有问题？谢啦！
182/2返回列表上一页12
查看: 3555  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

louisjackson

金虫 (小有名气)
我把测序序列跟我的引物比对了一下，上游引物没有匹配的，下游引物却有一定的匹配率，如图。这说明什么问题呢？
全长引物一直P不出目的条带来，请大神看一下我的引物设计有没有问题？谢啦！
比对.png
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
11楼2014-05-13 18:02:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 13:15:20
晕，下游引物你需要反向互补一下再比对，你把你的测序序列，你要比对的基因序列和你的引物序列都发一份给我吧，我给你比对下，luwei13566@sina.com，你测序是TA克隆后才测的序列还是PCR后直接测的序列？
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
12楼2014-05-13 22:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-05-13 22:11:41
晕，下游引物你需要反向互补一下再比对，你把你的测序序列，你要比对的基因序列和你的引物序列都发一份给我吧，我给你比对下，luwei13566@sina.com，你测序是TA克隆后才测的序列还是PCR后直接测的序列？...

真心谢谢你了，我是PCR后直接拿产物去测的序。我马上把序列发给你，有劳了！
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
13楼2014-05-14 15:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2013Trista

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by louisjackson at 2014-05-12 18:58:23
我想请教一下，您的全长引物是如何设计的？我是用的在线设计软件，用前面一段序列设计一对引物，采用其上游引物；用后面一段序列设计一对引物，采用其下游引物。最后再将这上下游引物作为一对引物送去合成，然后我 ...

你P全长序列是干嘛呢？我一般用Primer premier，还可以，你不妨试试。
赞一下 回复此楼
14楼2014-05-14 20:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
louisjackson(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-15 21:30:52
你确定你的cDNA没有问题？
cDNA是有组织特异性的，cDAN的质量也是关键。
赞一下 回复此楼
15楼2014-05-14 22:04:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 2013Trista at 2014-05-14 20:07:06
你P全长序列是干嘛呢？我一般用Primer premier，还可以，你不妨试试。...

我P全长是为了下一步构建过表达质粒。
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
16楼2014-05-15 14:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louisjackson

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-14 22:04:50
你确定你的cDNA没有问题？
cDNA是有组织特异性的，cDAN的质量也是关键。

这个我倒是不能确定，但普通引物跑出来的位置是对的，说明在该cDNA中是有表达的。
赞一下 回复此楼
It'snotaboutskill,butaboutwill.
17楼2014-05-15 14:24:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BioChen

银虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 13:15:31
引用回帖:
17楼: Originally posted by louisjackson at 2014-05-15 14:24:10
这个我倒是不能确定，但普通引物跑出来的位置是对的，说明在该cDNA中是有表达的。...

首先查查这个基因在哪个细胞系里面表达相对较高。即使你选对了细胞系，提取RNA转录的过程中，也极有可能得不到全长的cDNA。如果老是PCR不顺利，可以考虑换个cDNA。
赞一下 回复此楼
18楼2014-05-15 21:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 louisjackson 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭