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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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箫箫客

银虫 (小有名气)

[交流] lipo 2000干扰时可以带血清吗? 已有2人参与

各位大虾,小妹最近有个困惑,用lipo2000转染siRNA时 ,如果用opti-MEM转染4到6小时,即无血清饥饿转染时,细胞很容易就死亡了。后来看说明书上说可以带血清转染,但有的师姐说可以,有的师姐说不行,所以就很困惑,到底血清对干扰效率有影响吗?谢谢各位大侠了
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BioChen

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
箫箫客: 金币+8 2014-05-12 19:51:16
这个问题不在于用无血清培养基转染还是有血清培养基转染。lipo2000对细胞是有毒性的,这是阳离子脂质体的特性。如果细胞死亡过多,lipo用量相对说明书上减半,4小时后换完全培养基,不要等到6小时。我们发现这样做,转染效率基本不会受到影响,而且细胞死的也少了,还省钱。lipo不便宜。
你求助不发求助贴?
2楼2014-05-11 21:34:42
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箫箫客

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-11 21:34:42
这个问题不在于用无血清培养基转染还是有血清培养基转染。lipo2000对细胞是有毒性的,这是阳离子脂质体的特性。如果细胞死亡过多,lipo用量相对说明书上减半,4小时后换完全培养基,不要等到6小时。我们发现这样做, ...

今天急着想知道,所以就发了。我要用带血清转染的话,细胞不会死,就是不知道这种方法对转染效率有什么影响,我需要验证一下,我也可以试试你这种方法,谢谢你
3楼2014-05-11 22:13:01
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lincoln83

铁杆木虫 (正式写手)


箫箫客: 金币+1 2014-05-12 19:51:27
看看
4楼2014-05-11 22:33:23
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)


箫箫客: 金币+1 2014-05-12 19:51:30
blessing
5楼2014-05-11 22:56:09
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BioChen

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 箫箫客 at 2014-05-11 22:13:01
今天急着想知道,所以就发了。我要用带血清转染的话,细胞不会死,就是不知道这种方法对转染效率有什么影响,我需要验证一下,我也可以试试你这种方法,谢谢你...

你先做个RT-PCR或者western bolt检测下干扰效果,如果有效果,就按你自己的方法转染好了。
6楼2014-05-11 23:33:24
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worgjin

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们转质粒用lipo2000的时候,先在无血清opti里混匀质粒、lipo2000。放15min,然后一起加到细胞里,4h后换液
7楼2014-05-13 21:40:29
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寂寞RNA

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
溶解lipo2000用无血清opti,但是培养细胞过程中还是得加血清的,不会影响转染效率的,转染后3-4小时换液,没有问题的
8楼2014-05-14 21:55:11
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箫箫客

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 寂寞RNA at 2014-05-14 21:55:11
溶解lipo2000用无血清opti,但是培养细胞过程中还是得加血清的,不会影响转染效率的,转染后3-4小时换液,没有问题的

你好,那就用的siRNA和lip2000的比例是多少呢?以24孔板为例
9楼2014-05-16 18:51:41
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寂寞RNA

银虫 (初入文坛)


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引用回帖:
9楼: Originally posted by 箫箫客 at 2014-05-16 18:51:41
你好,那就用的siRNA和lip2000的比例是多少呢?以24孔板为例...

我们转siRNA用RNA MAX更多一些,lipo2000多用来转质粒。 一般是siRNA0.5OD+62.5ul DEPC水溶成20uM,分装成7.5ul每管,正好是24孔板四个孔的用量,lipo2000每孔1.2ul。楼主转染之后是要提RNA吗?如果是的话24孔板细胞量太少提RNA比较难提啊,不利于下一步实验。
10楼2014-05-17 20:36:03
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