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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » lipo 2000干扰时可以带血清吗？
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箫箫客

银虫 (小有名气)

[交流] lipo 2000干扰时可以带血清吗？ 已有2人参与

各位大虾，小妹最近有个困惑，用lipo2000转染siRNA时 ，如果用opti-MEM转染4到6小时，即无血清饥饿转染时，细胞很容易就死亡了。后来看说明书上说可以带血清转染，但有的师姐说可以，有的师姐说不行，所以就很困惑，到底血清对干扰效率有影响吗？谢谢各位大侠了
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1楼 2014-05-11 20:39:20
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BioChen

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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箫箫客: 金币+8 2014-05-12 19:51:16
这个问题不在于用无血清培养基转染还是有血清培养基转染。lipo2000对细胞是有毒性的，这是阳离子脂质体的特性。如果细胞死亡过多，lipo用量相对说明书上减半，4小时后换完全培养基，不要等到6小时。我们发现这样做，转染效率基本不会受到影响，而且细胞死的也少了，还省钱。lipo不便宜。
你求助不发求助贴？
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2楼2014-05-11 21:34:42
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箫箫客

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-11 21:34:42
这个问题不在于用无血清培养基转染还是有血清培养基转染。lipo2000对细胞是有毒性的，这是阳离子脂质体的特性。如果细胞死亡过多，lipo用量相对说明书上减半，4小时后换完全培养基，不要等到6小时。我们发现这样做， ...

今天急着想知道，所以就发了。我要用带血清转染的话，细胞不会死，就是不知道这种方法对转染效率有什么影响，我需要验证一下，我也可以试试你这种方法，谢谢你
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3楼2014-05-11 22:13:01
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lincoln83

铁杆木虫 (正式写手)
★
箫箫客: 金币+1 2014-05-12 19:51:27
看看
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4楼2014-05-11 22:33:23
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
箫箫客: 金币+1 2014-05-12 19:51:30
blessing
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5楼2014-05-11 22:56:09
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BioChen

银虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 箫箫客 at 2014-05-11 22:13:01
今天急着想知道，所以就发了。我要用带血清转染的话，细胞不会死，就是不知道这种方法对转染效率有什么影响，我需要验证一下，我也可以试试你这种方法，谢谢你...

你先做个RT-PCR或者western bolt检测下干扰效果，如果有效果，就按你自己的方法转染好了。
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6楼2014-05-11 23:33:24
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worgjin

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们转质粒用lipo2000的时候，先在无血清opti里混匀质粒、lipo2000。放15min，然后一起加到细胞里，4h后换液
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7楼2014-05-13 21:40:29
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寂寞RNA

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
溶解lipo2000用无血清opti，但是培养细胞过程中还是得加血清的，不会影响转染效率的，转染后3-4小时换液，没有问题的
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8楼2014-05-14 21:55:11
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箫箫客

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 寂寞RNA at 2014-05-14 21:55:11
溶解lipo2000用无血清opti，但是培养细胞过程中还是得加血清的，不会影响转染效率的，转染后3-4小时换液，没有问题的

你好，那就用的siRNA和lip2000的比例是多少呢？以24孔板为例
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9楼2014-05-16 18:51:41
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寂寞RNA

银虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
9楼: Originally posted by 箫箫客 at 2014-05-16 18:51:41
你好，那就用的siRNA和lip2000的比例是多少呢？以24孔板为例...

我们转siRNA用RNA MAX更多一些，lipo2000多用来转质粒。 一般是siRNA0.5OD+62.5ul DEPC水溶成20uM，分装成7.5ul每管，正好是24孔板四个孔的用量，lipo2000每孔1.2ul。楼主转染之后是要提RNA吗？如果是的话24孔板细胞量太少提RNA比较难提啊，不利于下一步实验。
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10楼2014-05-17 20:36:03
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