北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lazylord

金虫 (小有名气)

[交流] 关于酶切位点的一个问题

请问设计引物时要考虑酶切位点,说的是指在引物上要有这个位点吗?还是指在一对引物内所含的DNA序列中要有这个位点?请指点下...谢谢!
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觅一方静土,养一方人!上下求索可知方隅?孜孜自攻岂在方寸之间?
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

1:5'端加酶切位点,别忘了前边加几个保护碱基
2:选的酶切位点在你的基因中不能含有
3:在你的载体上要有,但一定要在多克隆位点里
4:要保证你的基因在载体上方向的正确
4楼2008-03-13 19:32:44
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P 多谢,欢迎常来交流!
设计在引物的5‘端,别忘了加3-5个保护碱基。 即 5’-GCC-酶切位点-特异性序列-3‘
细推物理须行乐。
2楼2008-03-13 12:52:09
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pengyang0914

银虫 (小有名气)

对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点,应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。引物的5’端决定着PCR产物的长度,它对扩增特异性影响不大,因此,可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物的5’端的修饰包括:加酶切位点;标记生物素、荧光、地高辛等;引入蛋白质结合DNA序列;引入点突变、插入突变、缺失突变序列;引入启动子序列等。
3楼2008-03-13 14:19:45
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jerome711

银虫 (小有名气)

很感谢各位对这个问题的解答,当然也要感谢楼主的好问题.
我正在做质粒重组.头大.
做懂得生活的人
5楼2008-03-14 11:45:02
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