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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于酶切位点的一个问题
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lazylord

金虫 (小有名气)

[交流] 关于酶切位点的一个问题

请问设计引物时要考虑酶切位点,说的是指在引物上要有这个位点吗?还是指在一对引物内所含的DNA序列中要有这个位点?请指点下...谢谢!
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觅一方静土，养一方人！上下求索可知方隅？孜孜自攻岂在方寸之间？
1楼 2008-03-13 12:40:59
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★ ★
asr(金币+2,VIP+0)::P 多谢，欢迎常来交流！
设计在引物的5‘端，别忘了加3－5个保护碱基。 即 5’-GCC-酶切位点-特异性序列-3‘
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细推物理须行乐。
2楼2008-03-13 12:52:09
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pengyang0914

银虫 (小有名气)
对引物的修饰一般是在5’端增加酶切位点，应根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。引物的5’端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大，因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物的5’端的修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。
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3楼2008-03-13 14:19:45
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
1：5'端加酶切位点，别忘了前边加几个保护碱基
2：选的酶切位点在你的基因中不能含有
3：在你的载体上要有，但一定要在多克隆位点里
4：要保证你的基因在载体上方向的正确
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4楼2008-03-13 19:32:44
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jerome711

银虫 (小有名气)
很感谢各位对这个问题的解答，当然也要感谢楼主的好问题．
我正在做质粒重组．头大．
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做懂得生活的人
5楼2008-03-14 11:45:02
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