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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 提取质粒
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闲庭晓苑

新虫 (初入文坛)

[交流] 提取质粒

pcr产物连接T载体，涂平板，培养过夜，挑取单菌落，做PCR 电泳检测，可以跑出目标条带，然后再扩大培养，提取质粒后再检测，竟然没有条带了，谁能帮我分析一下问题出在哪了呢！
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1楼 2014-05-08 15:36:17
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 闲庭晓苑 at 2014-05-09 07:58:16
不确定有没有相似的序列，我这次链接载体就是用来测序的 ！...

验证时对照很重要

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18楼2014-05-09 13:11:53
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)
你确定你连接的片段大肠杆菌中没有相似序列吗？怀疑本次实验失败，你下次挑菌验证时最好以大肠杆菌基因组做模板做个负对照，排除假阳性

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13楼2014-05-09 00:31:44
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)
也有可能是质粒没提好，试剂或操作可能有不合适的地方，在抗性条件下能长的起来？

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14楼2014-05-09 00:34:28
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假大空6楼
2014-05-08 16:21   回复  
闲庭晓苑(金币+1): 谢谢参与
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