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新虫 (初入文坛)

[交流] 提取质粒

pcr产物连接T载体，涂平板，培养过夜，挑取单菌落，做PCR 电泳检测，可以跑出目标条带，然后再扩大培养，提取质粒后再检测，竟然没有条带了，谁能帮我分析一下问题出在哪了呢！

1楼 2014-05-08 15:36:17

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新虫 (初入文坛)

引用回帖:

16楼: Originally posted by 闲庭晓苑 at 2014-05-09 07:58:16
不确定有没有相似的序列，我这次链接载体就是用来测序的！...

也就是说转化子现在抽提不出质粒但有抗是吧，排除抽提质粒操作问题，我怀疑是染的抗性杂菌，有可能大肠或杂菌本身有与你研究的序列相似的序列，你pcr验证时能扩出相应大小的条带，但并不是来源你构建的质粒，也就是说你的转化子是假阳性，所以抽不出质粒

[ 发自小木虫客户端 ]

17楼2014-05-09 13:10:21

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新虫 (初入文坛)

你确定你连接的片段大肠杆菌中没有相似序列吗？怀疑本次实验失败，你下次挑菌验证时最好以大肠杆菌基因组做模板做个负对照，排除假阳性

[ 发自小木虫客户端 ]

13楼2014-05-09 00:31:44

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新虫 (初入文坛)

也有可能是质粒没提好，试剂或操作可能有不合适的地方，在抗性条件下能长的起来？

[ 发自小木虫客户端 ]

14楼2014-05-09 00:34:28

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假大空6楼

2014-05-08 16:21 回复

闲庭晓苑(金币+1): 谢谢参与