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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请求哪位高手帮帮忙,有关土壤微生物DGGE的.
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halu

[交流] 请求哪位高手帮帮忙,有关土壤微生物DGGE的.

我现在在做有关土壤微生物的DGGE
但是不知道为什么总是出不了条带，一条条带都没有。
连marker都没有
但是，用琼脂胶可以跑出来，说明PCR是没有问题的
我怀疑是染色的问题，但换了好几种条件（增加染色时间等），就是找不出原因。
我的胶梯度是30%~60%，marker用3微升，PCR用20微升。
刚开始做，实在没什么经验，希望懂行的朋友帮帮忙！谢谢了！
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1楼 2008-03-12 13:20:38
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dreamsail

银虫 (正式写手)
我也想学,等待高手指点.
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2楼2008-03-12 19:25:46
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shuhua759

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
先做一个0-100%的梯度看看，时间稍微短一点。
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3楼2008-03-15 10:26:38
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halu

多谢!

我再试试吧.
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4楼2008-03-16 21:10:55
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lijinqing217

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
你把染胶的步骤给我看看，我来分析一下，你用什么是银染吗？
还有你的仪器是伯乐的还是其他仪器（ＩＮＧＥＲ）．
marker用3微升有点少，PCR用20微升有点多，不知道你的PCR效率怎样．
30%~60%也应该有条带的，还有你的片段有多大．
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5楼2008-03-19 22:17:46
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lijinqing217

金虫 (小有名气)
还有你跑多长时间啊
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6楼2008-03-19 22:19:51
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xtmgah31

银虫 (小有名气)
marker太少了，PCR产物太多,银染的灵敏度很高， 可能是你的染色液或显色液出问题了,建议重新配溶液染色,有些在染色之前会有一步固定DNA
祝你好运
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7楼2008-03-20 10:28:35
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