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halu

[交流] 请求哪位高手帮帮忙,有关土壤微生物DGGE的.

我现在在做有关土壤微生物的DGGE
但是不知道为什么总是出不了条带,一条条带都没有。
连marker都没有
但是,用琼脂胶可以跑出来,说明PCR是没有问题的
我怀疑是染色的问题,但换了好几种条件(增加染色时间等),就是找不出原因。
我的胶梯度是30%~60%,marker用3微升,PCR用20微升。
刚开始做,实在没什么经验,希望懂行的朋友帮帮忙!谢谢了!
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dreamsail

银虫 (正式写手)

我也想学,等待高手指点.
2楼2008-03-12 19:25:46
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shuhua759

捐助贵宾 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.. 新虫鼓励奖2个, 让你更开心
先做一个0-100%的梯度看看,时间稍微短一点。
3楼2008-03-15 10:26:38
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halu

多谢!

我再试试吧.
4楼2008-03-16 21:10:55
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lijinqing217

金虫 (小有名气)

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来
你把染胶的步骤给我看看,我来分析一下,你用什么是银染吗?
还有你的仪器是伯乐的还是其他仪器(INGER).
marker用3微升有点少,PCR用20微升有点多,不知道你的PCR效率怎样.
30%~60%也应该有条带的,还有你的片段有多大.
5楼2008-03-19 22:17:46
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lijinqing217

金虫 (小有名气)

还有你跑多长时间啊
6楼2008-03-19 22:19:51
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xtmgah31

银虫 (小有名气)

marker太少了,PCR产物太多,银染的灵敏度很高, 可能是你的染色液或显色液出问题了,建议重新配溶液染色,有些在染色之前会有一步固定DNA
祝你好运
7楼2008-03-20 10:28:35
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