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286792125

铜虫 (小有名气)

[求助] 有关柱层析的问题 已有1人参与

我的样品比较复杂,想用sephadexlh20凝胶柱分离出其中的物质然后鉴定,用的甲醇水梯梯度洗脱,分成若干组分后跑HPLC发现分离效果并不好,还是很多杂峰。
然后查文献,发现很多文献都是说用sephadexlh20反复层析,这里有个疑问,反复层析是什么意思?
比如第一次层析在10min-12分钟收集到了样品A,经过HPLC检测发现里面有目标峰,但是杂色谱峰很多。接下来再把样品A进入柱子层析,同样接收10min-12min的样品,会使物质A中的杂色谱峰减少,物质变得更纯?
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286792125

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1一米阳光 at 2014-05-15 19:24:15
反复层析会有更好的分离效果,像你举的例子,第一次层析后获得A样品,然后重复层析时候利用A上样,此时流动相的浓度梯度要增加,例如:第一次层析利用的洗脱剂浓度为1、2、3、4,A样品在2浓度下洗脱下来的,反复层析 ...

非常感谢!
4楼2014-05-21 20:54:47
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瑾言

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 欢迎常来分析版发帖交流 2014-05-08 09:22:01
286792125: 金币+20, 有帮助, 10 2014-05-08 10:53:15
反复层析有纯化的效果,但是不一定是在同样的时间点收集到这一物质
2楼2014-05-07 21:56:05
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1一米阳光

铁虫 (初入文坛)

反复层析会有更好的分离效果,像你举的例子,第一次层析后获得A样品,然后重复层析时候利用A上样,此时流动相的浓度梯度要增加,例如:第一次层析利用的洗脱剂浓度为1、2、3、4,A样品在2浓度下洗脱下来的,反复层析的时候就可以设置1.5、2、2.5的浓度,增加浓度梯度时可以减少HPLC的杂峰,略微提高样品纯度。希望对你有所帮助~~
sometimes·····
3楼2014-05-15 19:24:15
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