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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 有关柱层析的问题
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286792125

铜虫 (小有名气)

[求助] 有关柱层析的问题 已有1人参与

我的样品比较复杂，想用sephadexlh20凝胶柱分离出其中的物质然后鉴定，用的甲醇水梯梯度洗脱，分成若干组分后跑HPLC发现分离效果并不好，还是很多杂峰。
然后查文献，发现很多文献都是说用sephadexlh20反复层析，这里有个疑问，反复层析是什么意思？
比如第一次层析在10min-12分钟收集到了样品A，经过HPLC检测发现里面有目标峰，但是杂色谱峰很多。接下来再把样品A进入柱子层析，同样接收10min-12min的样品，会使物质A中的杂色谱峰减少，物质变得更纯？
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1楼 2014-05-07 20:56:33
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瑾言

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 欢迎常来分析版发帖交流 2014-05-08 09:22:01
286792125: 金币+20, ★有帮助, 10 2014-05-08 10:53:15
反复层析有纯化的效果，但是不一定是在同样的时间点收集到这一物质
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2楼2014-05-07 21:56:05
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1一米阳光

铁虫 (初入文坛)
反复层析会有更好的分离效果，像你举的例子，第一次层析后获得A样品，然后重复层析时候利用A上样，此时流动相的浓度梯度要增加，例如：第一次层析利用的洗脱剂浓度为1、2、3、4，A样品在2浓度下洗脱下来的，反复层析的时候就可以设置1.5、2、2.5的浓度，增加浓度梯度时可以减少HPLC的杂峰，略微提高样品纯度。希望对你有所帮助~~
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sometimes·····
3楼2014-05-15 19:24:15
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286792125

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1一米阳光 at 2014-05-15 19:24:15
反复层析会有更好的分离效果，像你举的例子，第一次层析后获得A样品，然后重复层析时候利用A上样，此时流动相的浓度梯度要增加，例如：第一次层析利用的洗脱剂浓度为1、2、3、4，A样品在2浓度下洗脱下来的，反复层析 ...

非常感谢！
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4楼2014-05-21 20:54:47
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