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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » CTAB法提取植物DNA
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心月之星

新虫 (初入文坛)

[求助] CTAB法提取植物DNA 已有5人参与

用CTAB法提取植物DNA ,用异丙醇沉淀后总是没有絮状沉淀出现，请问一下大家是什么原因？
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1楼 2014-05-07 09:33:10
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黄蔷薇

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是提取了很多次，跑电泳没有条带出现，真的很着急啊！楼主做出来了吗？分享一下经验吧！
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11楼2014-06-06 10:07:37
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棉花糖甜

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:14
本帖内容被屏蔽
2楼2014-05-07 10:25:55
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gutong1117

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
心月之星(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:25
原因太多了，希望楼主能够说的详细一点。异丙醇沉淀没有东西90%是因为前面的提取过程中不小心丢失了，因为总DNA的量其实是非常大的，不会出现RNA提取的时候沉淀不下来的状况，而且虽然我们说前面有些步骤不要太剧烈，但是那主要还是怕使DNA断裂对后续实验造成影响，对抽提本身影响没那么大。
最大的可能性有几种
1.材料选取的新不新鲜，研磨的充分不充分，液氮研磨之后有没有及时加入裂解缓冲液（研磨和裂解这部非常关键，80%的时候做不出来没东西都是这一步没做好）
2.选取材料DNA酶是不是很多，如果多的话，研磨解冻之前加入的裂解缓冲液中，螯合剂等抑制酶活性的物质的量应该提高。
3.CTAB等需要预热的物质，有没有预热好，需要保持温度的步骤温度是不是够
4.酚仿异戊醇抽提次数是不是太多，除蛋白的时候收集的上清量是不是太少
5.实验流程是不是太长，或者某些步骤混匀的太过激烈
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3楼2014-05-07 11:28:59
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-07 15:24:37
没有絮状沉淀未必是坏事，离心下来，加水溶解了跑个电泳看看

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4楼2014-05-07 12:07:15
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