24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 315  |  回复: 6
当前主题已经存档。

fwhnny

金虫 (小有名气)

[交流] 求助:基因克隆

我在年前做的关于一个酶基因的克隆,利用RACE技术将5'端,3'端和核心片断都拿到了,现在开学准备再拉一次全长,根据测序结果设计的两端特异引物,但就是克隆不出来?拿以前克隆核心片断时的引物作对照,核心片断还是拿到了的。很是郁闷。
请高手指点一下!
新手上路,请多关照。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)

是不是有较大的内含子呀,所以有两边的引物却拿不到全基因,不知道,瞎说了
2楼2008-03-11 20:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
你只有拉出全长,才叫真正克隆基因,逻辑全长的确问题颇多,这个问题经常发生,你应该好好分析一下。
1,从序列角度分析,你拼接的序列是否上NCBI比对,也就是确定头和尾是否真的是统一的。
2,模板问题,你应该是mRNA,是否由于基因太长,反转录有不到头的问题,可以用你以前的5端引物扩增看看。
3,你目前应该至少有3对引物,可以交叉扩一次,分析引物问题。
3楼2008-03-11 21:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwhnny

金虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
"从序列角度分析,你拼接的序列是否上NCBI比对,也就是确定头和尾是否真的是统一的",头和尾统一是什么意思啊?我拼接后拿到NCBI上比对,能得到相似度最高的就是其它物种中的该酶的基因,是不是这就叫头和尾统一?
    我的模板是mRNA,基因大概1700bp左右。反转录不到头也是可能的,但我也用了5‘race时的库,也没有扩出来。
   实际我现在扩得有1550bp,延伸时间90秒,会不会短了?
4楼2008-03-11 21:57:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
如果有其他物种的酶,理论上应该是头尾统一。
你目前应该至少有3对引物,可以自由配对,扩一次,分析引物,分析模板。确定引物和模板没有问题。
最后,上梯度或者降温试试。
5楼2008-03-11 22:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人

你的引物不会有问题吧。公司合成的准确性。有时会让你赶上的。
细推物理须行乐。
6楼2008-03-12 06:09:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwhnny

金虫 (小有名气)

多谢了,我再试试看,应该不会那么霉吧
7楼2008-03-12 13:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fwhnny 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 南京大学化学调剂 +9 景随风 2026-03-29 14/700 2026-03-29 21:22 by chixmc
[考研] 337求调剂 +4 《树》 2026-03-29 4/200 2026-03-29 20:52 by 唐沐儿
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 一志愿:西北大学,英一数一408-284分求调剂 +4 12.27 2026-03-27 4/200 2026-03-29 14:40 by zhshch
[考研] 070300化学354求调剂 +6 101次希望 2026-03-28 6/300 2026-03-29 12:57 by 无际的草原
[考研] 375求调剂 +4 雨夏整夜 2026-03-29 4/200 2026-03-29 12:09 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 332求调剂 +4 @MZB382400 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:02 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 312,生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 085701环境工程,267求调剂 +16 minht 2026-03-26 16/800 2026-03-28 12:16 by zllcz
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分,英语已过四六级,六级521,求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
信息提示
请填处理意见