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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 求助！！！质粒转化一直不成功
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瓶儿水青

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by 瓶儿水青 at 2014-05-09 00:49:47
除了热击、复苏和涂板，其他操作都应该在冰上进行，如果质粒没问题的话，怀疑你抗生素浓度太高或者用错了，不会是穿梭表达载体抗性选择错了吧，希望你搞清楚，不要嫌我小看人，有时候我们都会忽略些细节
...

热击温度42，复苏一般为37℃45min也要看你的质粒是否有特殊要求啦

[ 发自小木虫客户端 ]
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21楼2014-05-09 00:52:12
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393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
2点你需要确认
1.质粒的抗性，你确定没问题，换言之就是你必须确认你的质粒是否正确，不是老板说对就一定对的，虽然有时候老板就是权威！
2.你转化时质粒加入感受态或者感受态加入质粒以后别用枪去吹，稍微混匀即可，另外你加完LB孵育以后别离心了，直接拿所有的菌液去途板吧，如果害怕长的太多就同时划个线，妥妥的双保险！
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22楼2014-05-09 08:55:27
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miclebibi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的感受态估计有问题
可以买感受态来试试，另外你的质粒用量太少了，我都是用1比10，就是10ul质粒100ul感受态，而且还要加soc或者lb摇一小时之后才涂板，楼主可以试试
不行的话就买新的感受态用人家的protocol来做
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23楼2014-05-09 09:19:46
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

加完感受态放置半小时你确定是把插到冰里面放置的？如果是在冰上放置的，你可以考虑把热激时间增加到90秒，还有把要转化的质粒增加到5至10微升，按说转质粒一般没有不成功的
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24楼2014-05-09 11:53:11
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nemo88

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
25楼2014-05-09 16:52:30
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周冬梅

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

针对你的问题，我感觉最大的可能性是感受态的问题，感受态很脆弱，要在冰上融化，我平时都是直接取2ul的连接产物加入到50ul的感受态中，不吹打。
还有两点仅供参考：
1.热激42度90s.
2.不用复苏，直接涂板，这不注意不要把菌烫死。
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26楼2015-09-02 15:14:45
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biolee7

禁虫
本帖内容被屏蔽
27楼2022-01-07 14:37:54
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