| 查看: 14203 | 回复: 26 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
蓝老虎317银虫 (初入文坛)
|
[求助]
求助！！！质粒转化一直不成功 已有13人参与
|
|
|
最近质粒转化。是用BL21-DE3做表达。 有一次是一个师兄带着做，这里操作说明一下：（1）取1ul的质粒，然后用100ul的枪将感受态吸出来，打入含有1ul的tube中，吹打三四次，放半小时，(2)热激60s，(3)冰上放2min,(4)直接涂板（备注：这里涂布棒都是酒精灯烧过晾干的），过夜，结果长不出菌落。 前两次是自己做， 步骤大体相类似：(1)我直接将1ul的质粒加入到感受态的tube中（稍融化），没有吹打，只是用枪在感受态中旋转了四五圈，放半小时（2）热激90s，（3）冰上放2min，（4）加不含抗性LB 900ul到tube中，170r/min，1小时；（5）离心12000rp 1min ，去上清液900ul，剩下100ul吹打混匀；（6）涂板，过夜。 这里我和师兄的操作有些许区别： 1、很多同学觉得不加LB摇菌的话，菌可能含量太少，那是不是一定要摇呢？ 2、师兄之所以不摇，是因为之前做另一个质粒转化的时候，直接涂，的确长出了单克隆菌。 现在经过好几次的折腾，就是一个菌不长。感受态（借给其他组同学，她加自己的其他10ul质粒，其余步骤和我一样，长出了单克隆菌），抗性（自己用的卡纳和氨苄在其他菌表达的时候都是有效的），质粒质量（老板保证说质粒是没有问题的），可是依然没能长出单克隆菌。 我想问一下还有哪些可能的因素影响质粒的转化。 谢谢各位了！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有273人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
17楼2014-05-07 08:22:30
2楼2014-05-06 12:17:10
蓝老虎317
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 545.8
- 帖子: 9
- 在线: 13.7小时
- 虫号: 2863584
- 注册: 2013-12-11
- 性别: GG
- 专业: 药理学其他科学问题
3楼2014-05-06 12:22:49
4楼2014-05-06 12:26:52
