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cy211

木虫 (职业作家)

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49楼: Originally posted by yuyelin at 2014-05-26 13:24:37
不好意思,最近没怎么上,你把下面柱头打开,给流速冲下来就行,下面可以用烧杯接着...

没事,我感觉你应该最近没上比较忙,呵呵!我那个搞定了,现在的问题就是我有个疑问,就是这个葡聚糖柱子是我的样品先出来,之后是杂质,不过杂质走的比较慢,那你说,我上样一次没上完,那第二次上样我是不是必须得等到杂质也流出来之后才能上样啊?
还有我过完柱子后,这个柱子上的残存的东西用什么洗掉啊?是在柱子里面洗呢?还是把葡聚糖倒出来放在烧杯里面洗呢?求教!
51楼2014-05-27 11:23:16
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yuyelin

木虫 (正式写手)

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51楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-27 11:23:16
没事,我感觉你应该最近没上比较忙,呵呵!我那个搞定了,现在的问题就是我有个疑问,就是这个葡聚糖柱子是我的样品先出来,之后是杂质,不过杂质走的比较慢,那你说,我上样一次没上完,那第二次上样我是不是必须 ...

肯定是要第一次都流出来以后才能上第二次的样呀,用0.1MNaOH洗柱子。在柱子里洗,洗完用水洗,再用20%乙醇洗。
若嗔若痴,不见风云
52楼2014-05-28 15:45:04
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cy211

木虫 (职业作家)

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52楼: Originally posted by yuyelin at 2014-05-28 15:45:04
肯定是要第一次都流出来以后才能上第二次的样呀,用0.1MNaOH洗柱子。在柱子里洗,洗完用水洗,再用20%乙醇洗。...

我想请教一下你怎么知道你的杂质都流出来了啊?点板看么?是不是就是最后流出来的是水应该就可以上第2次样了?
还有洗柱子的时候可以用加压泵加压么?我看见有人说不能加压,但是那样流的超级慢啊?
53楼2014-05-28 15:58:53
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yuyelin

木虫 (正式写手)

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53楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-28 15:58:53
我想请教一下你怎么知道你的杂质都流出来了啊?点板看么?是不是就是最后流出来的是水应该就可以上第2次样了?
还有洗柱子的时候可以用加压泵加压么?我看见有人说不能加压,但是那样流的超级慢啊?...

一般分子筛洗脱一个柱体积就可以了,但是怕有些蛋白会吸附到柱子上,洗完一个柱体积后最好用NaOH洗一次。这个还是要看你样品了,自己把握。你用的什么仪器纯化呀?我用的是GE的AKTA。我不知道你指的加压什么意思?AKTA上会有三个压力,系统压力,柱子的进口压和出口压。柱子的进出口压差不能大过柱子和凝胶的耐受压。
若嗔若痴,不见风云
54楼2014-05-28 16:10:39
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cy211

木虫 (职业作家)

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54楼: Originally posted by yuyelin at 2014-05-28 16:10:39
一般分子筛洗脱一个柱体积就可以了,但是怕有些蛋白会吸附到柱子上,洗完一个柱体积后最好用NaOH洗一次。这个还是要看你样品了,自己把握。你用的什么仪器纯化呀?我用的是GE的AKTA。我不知道你指的加压什么意思? ...

分子筛洗脱?我也没有用过这个啊?你不说直接用NaOH洗一次不就行了吗?纯化?没有仪器啊?我用的加压的就是类似于给鱼加氧的小泵,不过加上那个泵,感觉流的稍微快点!不过我就怕把填料压坏了!
对了,我的杂质里面没有蛋白,就是盐和间硝基苯酚。就这两个!
55楼2014-05-28 16:21:07
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yuyelin

木虫 (正式写手)

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55楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-28 16:21:07
分子筛洗脱?我也没有用过这个啊?你不说直接用NaOH洗一次不就行了吗?纯化?没有仪器啊?我用的加压的就是类似于给鱼加氧的小泵,不过加上那个泵,感觉流的稍微快点!不过我就怕把填料压坏了!
对了,我的杂质里面 ...

有点无语了!应该补补课了。你这个就叫做分子筛层析,也叫凝胶色谱。不同的柱子和凝胶都有不同的耐压,这个要看测定的压力,你如果没有压力测定的东西直接加泵加压肯定不行。没有的话你就可以上第二次样品了。
若嗔若痴,不见风云
56楼2014-05-28 16:32:25
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cy211

木虫 (职业作家)

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56楼: Originally posted by yuyelin at 2014-05-28 16:32:25
有点无语了!应该补补课了。你这个就叫做分子筛层析,也叫凝胶色谱。不同的柱子和凝胶都有不同的耐压,这个要看测定的压力,你如果没有压力测定的东西直接加泵加压肯定不行。没有的话你就可以上第二次样品了。...

哦,这样啊,关键我确实不太懂这个,我直知道凝胶色谱这个定义,不好意思啊!还有这个压力我也没有仪器啊?怎么测定呢?我以为就像他们过硅胶的柱子,直接加压不是流速就加快了吗,呵呵!
57楼2014-05-28 16:43:58
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yuyelin

木虫 (正式写手)

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57楼: Originally posted by cy211 at 2014-05-28 16:43:58
哦,这样啊,关键我确实不太懂这个,我直知道凝胶色谱这个定义,不好意思啊!还有这个压力我也没有仪器啊?怎么测定呢?我以为就像他们过硅胶的柱子,直接加压不是流速就加快了吗,呵呵!...

建议你加个压力表,不然就用重力让他自己流吧
若嗔若痴,不见风云
58楼2014-05-28 17:26:45
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cy211

木虫 (职业作家)

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58楼: Originally posted by yuyelin at 2014-05-28 17:26:45
建议你加个压力表,不然就用重力让他自己流吧...

好吧,感谢你的回复,我都不好意思了,天天老麻烦你!确实不好意思!我刚才看了一眼我用的小泵是0.02Mpa,不过我看下说明书上写着填料的最大压力应该是100cm的水柱,我换算一下大概应该是0.01Mpa,超过了,我很担心会不会把我的填料压坏,哎!
59楼2014-05-28 18:09:27
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andysuko

新虫 (初入文坛)

支持~~~~~~~~~~~~
60楼2014-05-28 20:02:36
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