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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 消失的蛋白
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laqiwe

铁虫 (正式写手)

[求助] 消失的蛋白 已有1人参与

HiS标签纯化重组蛋白，纯化后分光光度计（Thermo NanoDrop 2000）测蛋白浓度是1mg/ml,跑蛋白考马斯染色结果什么都没有，纯化前的对照有条带，这是什么原因呢？明明测浓度有蛋白，跑胶却什么都没有！！！求解
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1楼 2014-04-30 14:33:36
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meng_xu

铜虫 (小有名气)
蛋白定量还是用bradford assay比较好
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3楼2014-05-02 07:09:25
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yanlili

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首要你要做重复试验，很多结果是小错误导致的，如果你的蛋白很多，而纯化后都没了，确实是很奇怪
其次，你有没有把每个吸收峰做电泳？如果是在别的洗脱峰里，那就是说你弄错了峰，如果哪都没有，可能是在哪一步损失掉了。

还有可能紫外吸收是别的东西，不是蛋白质，或者有很多杂质的吸收。你中间有加什么步骤吗？比如浓缩什么的，考染的灵敏度在1ug，如果什么结果都没有，而纯化前有，要不然是浓度太低，要不就是有核酸之类的。测蛋白浓度，bradford法，BCA法都能排除一些物质的干扰。
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2楼2014-04-30 15:13:45
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