为什么我用gDNA连一个3kb的片段都扩不出来？ - 分子生物 - PCR相关 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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Carnity

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9楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-04 06:17:02
1. 什么基因组？如何提取的DNA，保存方法是什么？保存了多久？
2. 3k的片段，你的pcr条件是什么？
3. 引物的设计，对于gDNA来说，20左右的碱基已经足够了，只要在基因组其他位置没有错配区就没有问题。

呃，问题没那么复杂，模板量，PCR体系、PCR条件的弹性空间都是有的。个人感觉要么就是模板问题，要么就是引物问题。不知道其他条件会不会产生较大影响。

11楼2014-05-05 17:20:31

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meng_xu

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引用回帖:

11楼: Originally posted by Carnity at 2014-05-05 17:20:31
呃，问题没那么复杂，模板量，PCR体系、PCR条件的弹性空间都是有的。个人感觉要么就是模板问题，要么就是引物问题。不知道其他条件会不会产生较大影响。...

当然会有影响，虽然不大，但是还是会，条件还是好好摸摸，比较好

12楼2014-05-06 04:36:30

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朱多龙

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这个再正常不过了，你自己也说了之前能扩出来，然后就扩不出来了的。基因组DNA本来就容易断裂之类的，你存的时间久了不知道在那个位置发生了断裂。我放-80的基因组DNA一般也就能用三个月，所以果断重提基因组了。

13楼2014-05-06 10:04:44

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