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逆天打酱油

金虫 (正式写手)

[求助] IP后WB,蛋白比预期的大,正反拉蛋白都做了,都是大十几kD已有4人参与

最近在苦一个图,所以做了个ChIP,然后用我的目标蛋白(蛋白A)做WB,结果发现杂出来的带比蛋白A的理论大小大十几kD。
我们怀疑可能是非特异性条带的结合,于是尝试用蛋白A做CO-IP,然后用ChIP的抗体做WB,发现杂出来的带也比预计的大十几kD。

现在怀疑可能情况有一下几种:
1.发生了什么修饰 造成蛋白变大
2.结合了其他分子 但是由于WB是变性的 所以这一点上我们持有怀疑意见
3.非特异性结合 这一点上急需方法来排除,希望高手可以指教一下

我们实验室一直做RNA相关实验,最近才开始摸索Chromatin相关实验,小菜鸟满脸血跪求指教 OTZ
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HTKJ

禁虫 (小有名气)

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2楼2014-04-24 10:46:32
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