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ltf82

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR用Taq酶还是pfu?

PCR高手们,请问大家做PCR时用Taq酶还是pfu?如果用Taq出现碱基突变的几率高嘛?有经验的虫友赐教!
还有一般PCR是不是循环次数越多,出现突变的几率也越高啊?
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biocore

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心.
和你扩增的长度,以及试验要求有关系。
普通试验,用Taq就可以了。
如果长片段,并且实验要求高,那么就要高保证酶。
一般的高保真酶,里面是混杂普通的Taq和Pfu。
NEB有一款phusion酶,是保真性能,目前最高的。
PCR循环次数越多,出现突变的几率,不会变高,突变几率只和酶本身的特性有关。
2楼2008-03-06 17:20:07
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ltf82

铜虫 (初入文坛)

我的目的片断在1500bp左右,PCR扩增是用来表达的,那需要用高保真酶嘛?扩增温度在50度左右,突变几率怎样阿?
3楼2008-03-06 18:43:31
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biocore


reasonspare(金币+1,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.谢谢交流
呵呵,基本不需要,1.5k的,扩出来,测个序,看看,应该不会有什么错配
4楼2008-03-06 19:20:35
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ltf82

铜虫 (初入文坛)

我就担心突变之后中间产生终止密码子,就表达不了了
5楼2008-03-06 19:43:22
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.兄弟很热心. 新虫鼓励奖2个
理论上说puf更耐高温,校正能力更强。
PCR的循环次数越多,体系越不适合合成DNA。
6楼2008-03-06 21:02:14
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